它能够准确地根据细胞形态特征进行分类计数，并可及时发现异常细胞。血液分析仪进行细胞分类主要是从细胞的体积大小、细胞核形、细胞化学染色等方面进行检测，检测速度快，分析细胞多，适宜于大批量标本的分析。对其检测出来的异常标本，要准确识别细胞类别及确认病理改变还必须以显微镜检查为准。
[应用意义]
在不同的生理状态下，不同种类白细胞数目波动较大。如运动、寒冷、消化期、繁殖期等，此外，在机体失血、剧痛、急性炎症、慢性炎症等病理状态下，白细胞也增多。例如，急性感染、急性中毒、严重组织损伤、恶性肿瘤等中性粒细胞增多；某些病毒、细菌感染、某些慢性感染时，淋巴细胞数量增多。 [注意事项]
1、所用玻片必须干净，无油污。
2、如染色太浅，可按照原来步骤重染；染色太深或有沉淀物则可用甲醇脱色后重染。 3、如白细胞核为天蓝色则染色时间过短。如红细胞呈紫红色，表示染色时间过长。 4、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。
5、冲洗时不可先倾倒染色，应先轻轻摇动玻片，缓慢加水使沉渣泛起，然后再用水冲洗。
6、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。
[思考题]
1、试述瑞氏（Wright’s）染色法区分各种白细胞的依据？
2、怎样才能制备一个形态清晰的血涂片？
3、实验所得结果与正常值相对照，有何变异？为什么？
实验14 红细胞沉降率的测定（选修）
[目的与原理]
掌握测定红细胞沉降率的方法，并测定不同鱼类和患病鱼类的红细胞沉降率。 红细胞在循环血液中具有悬浮稳定性，但将加有抗凝剂的血液置于一垂直血沉管中，红细胞由于重力的关系，将逐渐向下沉降。通常以在第1小时末红细胞下降的距离作为沉降率的指标。红细胞的沉降率在某些疾病加快，这主要由于红细胞能较快地发生叠连，使其总外表面积与容积之比减小，因而与血浆的摩擦力减小，下沉加快。红细胞叠连的形成，主要取决于血浆性质的变化，这种测定有助于某些疾病诊断。目前测定红细胞沉降率常用的方法已有多种。本实验只介绍魏氏（Westergren）法。 [实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
魏氏沉降管，血沉架，吸管，5ml注射器，8号注射针头，3.8％枸橼酸钠溶液。 [实验步骤]
1、准备一个容量为5ml的小瓶盛3.8％枸橼酸钠溶液0.4ml, 然后用注射器从鱼尾静脉或直接从心脏取血2ml，准确地将1.6ml血液注入小瓶内。随后颠倒小瓶3～4次，使血液与抗凝剂充分混匀，但需避免剧烈振荡，以免破坏红细胞。
2、用魏氏沉降管吸取上层抗凝血液到刻度“0”处，不能有气泡混入。擦去尖端周围的血液，将血沉管垂直固定于血沉架上静置，并记录时间。
3、1小时末，观察沉降管内血浆层的高度，并记下mm数值，该值即为红细胞沉降率
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（mm／h末）。
4、小心取下沉降管，用水洗涤，并晾干。 [方法评估]：
（Westergren）法为测定红细胞沉降率的标准方法。
[应用意义]
血沉可用来表示红细胞悬浮稳定性的大小。红细胞沉降率受生殖周期、营养情况、化学物质、季节变化、疾病等影响。当有炎症反应时，血沉加快。
[注意事项]
1、本实验血液与抗凝剂的容积比规定为4：1，应用新配制的抗凝剂。
2、自采血时起，本试验应在2h内完毕，否则会影响结果的准确性。 3、实验用的器材应清洁、干燥。
4、若红细胞上端成斜坡形或尖锋形时，应选择斜坡部分的中间位置计算。 5、血沉的快、慢与温度有关。在一定范围内温度愈高，血沉愈快。故实验时室温以18~25℃左右为宜。
[思考题]
1、红细胞沉降率为什么可以保持相对稳定？
2、影响血沉的因素有哪些？为什么？
3、实验动物红细胞沉降率的正常值是多少？检测血沉有何意义？
实验15 红细胞比容的测定（选修）
[目的与原理]
掌握测定红细胞比容的方法，并测定不同鱼类的红细胞比容。
实验用Wintrobe 管（简称温氏管或称分血计）测定。从血管中抽出血液，放入加有一定量抗凝剂的Wintrobe管中，经离心沉淀后，管中的血液分为两层：上层是淡黄色的透明液体—血浆，下层是挤压得很紧的呈暗红色的红细胞，红细胞与全血的容积之比称为红细胞比容，也称红细胞压积，通常用百分数表示。大部分鱼类的红细胞比容在20~30%之间。 [实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
Wintrobe 管，台式离心机（4000rpm），抗凝剂（1%肝素钠溶液或草酸盐溶液），5ml注射器，消毒棉球，凹瓷盘，细长吸管
[实验步骤]
1、采血：用经肝素液湿润过的注射器采血。鱼在鳃静脉或心脏取血。
2、用细长吸管取经充分混合的抗凝血注入温氏管至“0”处，注意勿产生气泡。然后经3000——3500rpm离心沉淀20分钟，停机取出温氏管，读数并记录。再离心10分钟，取出样品管第二次读数。如两次读数一样，说明红细胞层体积不再缩小。如读数小了，还须第三次离心。直至红细胞层高度不再变化，最后一次读数即为红细胞层真实高度。红细胞层的上面常有一层白细胞和血小板组成的白色层，读数时不要将此层计算在内。
3、测定了红细胞层的高度和总液体的高度，然后按下面公式计算红细胞比容： 红细胞比容（%）= 红细胞的高度（mm）/ 总液体高度（mm）3100 [方法评估]
测定红细胞比容的常用方法，简便易于操作。 [应用意义]
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该项指标可用作判断机体的健康状况和营养状况。
贫血时，红细胞数下降，红细胞比容下降；养状况不良出现贫血或由于其它疾病引起贫血时，红细胞比容下降。而且红细胞比容是影响全血粘度最重要的指标。 [注意事项]
1、取血时一定要避免溶血。
2、自采血时起，本试验应在2h内测定完毕。 [思考题]
1、红细胞比容的变化与何因素有关？ 2、测定红细胞比容有哪些实际意义？
3、将血吸入温氏管时如何防止有气泡？
实验16 红细胞渗透脆性的测定——浓度梯度法（必修）
[目的与原理]
掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶液。将红细胞置于等渗溶液中， 其形态和容积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力大小与红细胞膜脆性有关。通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。刚能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。在刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。 [实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl， 蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。 [实验步骤]
1、 取小试管10支，编号后，按下表制成不同浓度的NaCl 溶液。 试管号 1%NaCl (ml) 蒸馏水（ml） NaCl溶液浓度
（%）
1 0.90 0.1 0.9
2 0.65 0.35 0.65
3 0.60 0.40 0.60
4 0.55 0.45 0.55
5 0.5 0.5 0.5
6
7
8 0.35 0.65 0.35
9 0.30 0.70 0.30
10 0.25 0.75 0.25
0.45 0.40 0.55 0.6 0.45 0.40
2、 用润湿过抗凝剂的注射器从鱼尾静脉采1毫升血，立即向每一试管中各加一滴血，
将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观察结果。多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。加以混合，以备重复实验使用。
3、观察结果：记录开始溶血和完全溶血的两管NaCl溶液浓度。
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按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血。
（1）上清液无色，管底为混浊红色或有沉淀的红细胞，表示没有溶血。
（2）上清液呈淡红色，管底为混浊红色表示只有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶
血。开始出现部分溶血的NaCl溶液浓度，即为红细胞的最小抵抗值，也是红细胞的最大脆性。
（3）管内液体完全变成透明的红色，管底无细胞沉积，为完全溶血。引起红细胞完
全溶解的最低NaCl溶液浓度，即为红细胞的最大抵抗值，即红细胞的最小脆性。 [方法评估]
该方法筒单实用，但应严格控制血量（血液和NaCl溶液之比约为1:25）和防止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确度。本试验敏感性较差，需结合其他实验室检查结果进行分析。
[应用意义]
渗透脆性指标对于掌握细胞膜的特性、形态和生理功能具有一定意义，如膜的特性、流动性、结构、组成成分等的改变，均使膜的脆性发生改变。 [注意事项]
1、配制1.0%NaCl溶液，称量必须准确。
2、取血时一定要避免溶血。
3、滴加血液时要靠近液面，使血滴轻轻滴入溶液以免血滴冲击力太大，使红细胞破损而造成溶血的假象。．
4、加入血滴后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈振荡。
5、应在光线明亮处观察结果。如对完全溶血管有疑问，可用离心机离心后，取试管底部液体一滴，在显微镜下观察是否有红细胞存在。
[思考题]
1、为什么同一个体的红细胞渗透脆性可以不一样？ 影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？
2、何谓红细胞的最小抵抗值和最大抵抗值？ 3、输液时为何要采用等渗溶液？
实验17 蛋白质含量的测定Ⅰ—双缩脲法（必修）
[目的与原理]
掌握测定蛋白质含量的原理及技术，并应用双缩脲法测定血清或组织提取液中蛋白质的含量，加深对双缩脲试剂与蛋白质反应机理的了解。
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物：
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在碱性溶液中双缩脲与硫酸铜反应生成紫红色络合物，此反应称双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都有双缩脲反应。蛋白质含有多个肽键,在碱性溶液中能与Cu络合成紫红色化合物，在540nm处有最大吸收。干扰物有巯基乙醇(硫醇)以及具有肽性质的缓冲液如Tris缓冲液等。可用沉淀法除去干扰物,即用等体积10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白质,弃去上清液,再用已知体积的0.05—0.10mol/L氢氧化钠溶解蛋白质。 [试剂与器材] 试剂：
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