5、 蛋白质与酶的修饰技术
1、酶分子修饰的概念和意义：
概念：通过各种方法改变蛋白/酶的分子结构，从而改变其某些特性和功能。主要途径有化学途径和分子生物学途径。 意义：
① 提高蛋白/酶的活力,满足/适应生产工艺的要求 ② 增强蛋白/酶的稳定性
③ 提高、降低或消除蛋白/酶的抗原性 ④ 研究和了解蛋白/酶的结构：
⑤ 弥补天然蛋白的不足，赋予优良性状 2、化学修饰的手段与方法：
经常被修饰的残基：亲核：丝、半胱、甲硫、苏、赖、组 亲点：酪、色 3、侧链基团的修饰
（1）羧基修饰反应----------水溶性碳二亚胺类（最标准）、硼氟化三甲烊盐
（2）氨基修饰：采用某些化合物使酶分子侧链氨基发生改变，从而改变酶蛋白的空间构象的方法称为氨基修饰
① 亚硝酸
② 2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）、
③
④
（3）巯基修饰：巯基在许多酶中是活性中心的催化基团，巯基还可与另一巯基形成二硫键，因此对稳定酶的结构和发挥催化功能具有重要的作用。常用修饰剂：烷基化试剂（碘乙酸、碘乙酰胺）、马来酰亚胺
（4）咪唑基修饰：组氨酸(咪唑基)位于许多酶的活性性中心。常用咪唑基修饰剂：焦碳酸二乙酯（DPC）和碘代乙酸
（5）酚羟基（酪氨酸）修饰反应：Tyr（酪氨酸）残基修饰主要是酚羟基的修饰，Thr和Ser残基修饰为羟基修饰，但反应条件苛刻
（6）胍基(精氨酸）化学修饰反应：采用二羰基化合物与胍基反应生成稳定的杂环，从而改变酶分子空间构象的方法。修饰剂：丁二酮、1，2-环己二酮、丙二醛和苯乙二醛（二羰基化合物）
（7）吲哚基(色氨酸)化学修饰反应：
4、大分子结合（共价）修饰：修试剂：聚乙二醇（PEG）、单甲氧基聚乙二醇（MPEG）、右旋糖酐
5、分子内交联修饰：双功能基团化合物（双功能试剂）：戊二醛、己二胺、葡聚糖二乙醛等，在酶蛋白分子中相距较近的两个侧链基团之间形成共价交联，从而提高酶稳定性的修饰方法。
6、金属离子置换修饰：把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法。作用如下：
① 阐明金属离子对酶催化作用的影响 ② 提高酶活力 ③ 增强酶的稳定性 ④ 改变酶的动力学特性
7、氨基酸化学置换修饰：将酶分子肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸的修饰方法。缺点：难度大，成本高，专一性差，而且对酶分子逐个进行修饰，操作复杂，难以工业化生产。
8、蛋白质片段嵌合修饰：一个天然多肽与一个人造多肽（或化学修饰）相缔合，产生半合成结构
9、分子生物学方法：定点突变技术
