8、驱蚊草是把天竺葵和香茅草的叶肉细胞进行诱导融合培育而成的。下列关于驱蚊草培育的叙述中，错误的是 （C）
?A．培育方法属于细胞工程育种，其优点是能克服远缘杂交不亲和的障碍
?B．培育过程要用到纤维素酶、果胶酶、PEG等试剂或离心、振动、电刺激等方法 ?C．培育手段是植物体细胞杂交，它不同于植物组织培养，无愈伤组织和试管苗形成 ?D．驱蚊草不能通过天竺葵和香茅草有性杂交而获得是因为不同物种间存在生殖隔离 二、 下图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：
（1）步骤①去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体，最常用的方法是酶解法。 （2）步骤②一般常用的化学试剂是PEG , 目的是诱导不同植物原生质体融合。 （3）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是植物组织培养，其中步骤④相当于脱分化，步骤⑤相当于再分化。 （4）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使远源杂交亲本的遗传特征能够在新的植物体上有所表现，其根本原因杂种植株获得双亲的遗传物质。 （5）若运用传统有性杂交方法能否实现这一过程？不能。并说明理由因为不同种生物之间存在生殖隔离。因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于克服远源杂交不亲和的障碍。 （6）利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？为什么？ 答：否，有性生殖的过程中进行减数分裂，才遵循孟德尔的遗传规律。
第七章
一.思考题
1. 为什么花药培养时要先进行预处理？
答：预处理的目的是改变小孢子的发育方向，使尽可能多的小孢子从配子体发育途径转
向孢子体发育途径（即成为具胚胎发生潜力的小孢子）。适当的预处理可以增强雄核生殖的诱导效应，使绿苗产量大量增加。 2. 单倍体植株倍性鉴定？？
答：1、直接鉴定法（染色体计数法）：通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，采用
压片法和去壁低渗法进行染色体标本制备，需用卡宝品红、乙酸洋红或铁矾-苏木精等染液进行染色、镜检和计数。 2、间接鉴定法
? 植株形态观察法：单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。 ? 细胞形态鉴定法：叶片保卫细胞大小、单位面积上的气孔数及保卫细胞中叶绿体的
大小和数目与倍性具有高度的相关性。
? 此外，还有DNA含量测定（流式细胞仪） ?核体积测量法 ?生化与分子标记鉴
定
3. 单倍体植株的染色体加倍？？
答：对单倍体植株进行染色体加倍处理主要采用化学诱变剂。
? 常用的化学诱变剂：秋水仙素、8-羟基喹啉、对二氯苯、富民农等。 ?利用秋水仙素诱导花粉植株染色体加倍的方法有：
? （1）小苗处理法（整株幼苗浸泡于一定浓度的秋水仙素中） ? （2）茎尖处理法（以蘸满一定秋水仙素溶液的棉球直接置于植株的顶芽或腋芽上） ? （3）培养基处理法（将单倍体植株的不同外植体或细胞接种于含有一定浓度的秋
水仙素的培养基中培养）
二.练习题 一.单选题
1、植物的花药培养形成的植株在下列育种过程中最有意义的是（C）
A．杂交育种 B．人工诱变育种 C．单倍体育种 D．基因工程育种 2、花药培养技术与植物组织培养技术的不同之处在于（D） A．培养基配制方法 B．无菌技术 C．接种操作 D．选材 3、在进行花药培养时，花药应选择什么时期？（B）
A 双核期 B 单核期 C三核期 D 四分体期
第八章
一.思考题
1. 幼胚培养需要比较复杂的培养基为什么？
答：因为幼胚在胚囊里生长时是处于异养状态，幼胚的生长发育不仅依赖于它们细胞
间的代谢，而且还依赖于周围胚乳的丰富营养。所以，要使离体胚能继续发育至成熟胚，必须尽可能提供与幼胚相似的环境条件。 2. 弱光和黑暗更有利于幼胚培养为什么？
答：因为在自然条件下，胚在胚珠内发育是不见光的。光照对胚芽生长有利，而黑暗
则对胚根生长有利，大多数处于球形期至心形期的幼胚，需要在黑暗条件下培养2周后再给予一定时间的光照。
3. 在一朵花中胚珠与子房的位置关系怎样？各发育成什么？
答：子房是被子植物生长种子的器官，位于花的雌态下面，一般略为膨大。子房里面
有胚珠，胚珠受精后可以发育为种子，是被子植物花中雌蕊的主要组成部分，子房由子房壁 和胚珠组成。当传粉受精后，子房发育成果实
4. 植物胚胎培养中成熟胚与幼胚培养有何不同？幼胚培养时胚的发育方式有哪几种？各有什么特点？ 答：（1）成熟胚在比较简单的培养基上（只要含有大量元素的无机盐及糖），一般即能
正常萌发生长。但在有些情况下，对于远缘杂交胚的培养或次生胚的增殖等，则需要加入有机物或生长调节剂。而幼胚培养需要比较复杂的培养基因为幼胚在胚囊里生长时是处于异养状态，幼胚的生长发育不仅依赖于它们细胞间的代谢，而且还依赖于周围胚乳的丰富营养。所以，要使离体胚能继续发育至成熟胚，必须尽可能提供与幼胚相似的环境条件。
（2）a、胚性发育：幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，
最后形成成熟胚（有时甚至可能类似种子），然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株。这种途径发育的幼胚，一般一个幼胚将来发育成一个植株。
?b、早熟萌发：幼胚接种后，不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，这
种现象即称为早熟萌发。这种方式形成的幼苗往往细弱、畸形，难以成活。因此 在幼胚培养中应防止早熟萌发。
?c、产生愈伤组织：在幼胚培养中常能在追加生长调节剂时诱发愈伤组织产生、进而
分化形成胚状体或不定芽。
5. 比较胚培养、胚珠培养和子房培养的异同。 答：（1）胚培养分为成熟胚培养和幼胚培养两种。成熟胚为子叶期以后的胚其在简单
的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。幼胚培养，培养技术和条件要求较高。其作用为克服远缘杂交不亲和性，打破种子休眠缩短育种周期提高种子萌发率。
（2）胚珠培养是在人工控制的条件下对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的
技术。由于幼胚分离难度大而胚珠分离则相对容易故在幼胚培养时常采用胚珠培养。胚珠培养分为，受精胚珠培养它可防止杂种胚早期败育获得杂种植株与未受精胚珠培养它可作为试管受精的基础未受精胚珠培养能培养获得单倩体植株用于单借体育种。
（3）子房培养包括授粉子房和未授粉子房培养，授粉子房培养形成成熟果实和种
子，未授粉子房培养形成小的无籽果实。其作用为获得杂种植株，未授精子房培养为试 管受精提供技术基础，且未受精子房培养能获得单倍体植株用于单倍体育种。
二.练习题 一．判断题
1、在植物胚培养中幼胚培养较成熟胚易成功。（×）
2、完全成熟的胚乳，必须借助原胚萌发，使其活化（√）
3、植物离体授精过程中卵细胞和精细胞的分离均可采用酶解法（×） 4、未授粉胚珠的培养与花粉培养一样可获得单倍体植株（√）
5、利用未授粉的子房培养应选择胚囊发育到单核至四核时期的子房为材料（×） 6、在幼胚培养中，幼胚发育阶段越早，所要求培养基中的蔗糖浓度越低。（×） 二．选择题
1. 胚乳培养是否必须有原位胚的参加，主要与（C）有关
?A、培养基和培养条件 ?B、培养基和胚乳的年龄
?C、胚乳的生理状态和胚乳的年龄 D、胚乳的生理状态和培养条件 2. 未授粉胚珠以发育至（B）胚囊进行培养为最佳 ? A、四核胚囊B、八核胚囊
? C、成熟胚囊 D、B和C
第十章
一.思考题
1. 分类①②③中哪一种是最理想的离体保存材料？为什么？①愈伤组织、悬浮组织、原生质体 ②花粉和花粉胚 ③茎尖、腋芽原基、胚、幼龄植物*
答：第三类：茎尖、腋芽原基、胚、幼龄植物，因为其遗传稳定性好，易于再生，且
细胞体积小，液泡小，原生质浓稠、含水量较低，细胞质较浓，比含有大液泡的愈伤组织细胞更抗冻。 2如何选择解冻速度？*
答： 1、与材料的特性有关
2、与材料原来冷冻速度有关 一般来说：
冷冻速度超过-15℃/min，解冻时宜采用快速解冻，否则应采用慢速解冻；
液泡小和含水量少的细胞（如茎尖分生组织）可采用快速解冻法；
液泡大含水量高的细胞，脱水处理后的干冻材料以及木本植物的冬眠芽则宜用慢速解冻法。
3. 细胞冷冻保存要注意的关键问题是什么？
答：细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成，需要
重点考虑保护剂使用和冷冻方法两个重要因素。 4. 冷冻保护剂有几类？各有何特点？ 答：（1）渗透性冷冻保护剂如：甘油、二甲亚砜等。
特点：1）易与水分子结合，易穿透细胞膜进入细胞内部，从而降低细胞冰点，
提高细胞膜对水的通透性。
2） 冻存时，保护剂可促进细胞内水分渗出细胞外，从而减少胞内冰晶的
形成；
3）复苏时，促进细胞外水分进入细胞，缓解渗透性肿胀引起的损伤。
（2）非渗透性冷冻保护剂如：聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖等 特点：1）一般是些大分子物质，不能渗透到细胞内部，但能溶于水，可稀释
细胞外电解质的浓度，从而减少溶质损伤；
2）这些大分子物质可结合水分子，降低细胞外自由水的含量，减少胞
内冰晶的形成。
第十二章
一. 思考题
1. 动物细胞培养所用的培养基类型有几种？
答：（1）BME（2）MEM（3）DMEM（4）IMDM（5）RPMI-1640 （6）M199 2. 离体动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？
答：不能，动物细胞的全能性随分化程度提高而受到限制，分化潜能变弱，所以动物
细胞培养只能是细胞数目增多而不能发育成新的动物个体。 二. 练习题 1、一般来说，动物细胞体外培养具有一定的生存期，而且细胞分裂次数也是有限的。（√） 2、分化程度高的比分化低的容易培养;肿瘤组织比正常组织容易培养。（×）
3、利用成纤维细胞比上皮细胞贴壁过程快，大部分成纤维细胞能在短时间内完成附着过程，而上皮细胞在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，以此差别来纯化细胞的方法称酶消化法。（×）
4、在倒置显微镜下可看到动物细胞培养液中有纵横交错的丝状、管状和树枝状菌丝，可判定是已被细菌污染了。（×）
5、中期阻断法是适于贴壁细胞的选择性同步化的方法（×）
6、培养液由桃红色变为黄色，是由于CO2积累过多，培养液发生酸化，需要及时调整pH，否则会对细胞发生不利影响，严重时细胞脱落发生死亡。（√）
第十三章
一. 思考题
1. 仙台病毒、PEG、电融合的原理分别是怎样的？
答：仙台病毒：仙台病毒囊膜上有许多具有凝血活性和唾液酸苷酶活性的刺突，它
们可与细胞膜上的糖蛋白起作用，使细胞相互凝集，再通过膜上蛋白质分子的重新分布，使膜是脂类分子重排，从而打开质膜，导致细胞融合。
