异戊烯腺嘌呤(Zip),它们经高温高压灭菌后性能仍稳定。SLKT受光易分解,故应在4-5℃低温黑暗下保存,细胞分裂素有促进细胞分裂和分化,延长组织衰老,增强蛋白质合成,抑制顶端优势,促进侧芽生长及显著改变其他激素作用的特点。
通常认为,生长素和细胞分裂素的比值大时,有利于根的形成;比值小时,则促进芽的形成。低浓度2.4-D有利于胚状体的分化,但妨碍胚状体进一步发育 ,NAA有利于单子叶植物分化,IBA诱导生根效果最好。
赤霉素(GA)的生理作用是促进植物伸长,节间伸长,分生组织芽生长,诱导淀粉的合成,打破休眠和促进开花等,与生殖器官发生有关,一般不常用。
脱落酸是植物体天然存在的生长抑制物,有促进叶部脱落,诱导休眠作用,与生殖器官发生有关。
乙烯是植物内唯一呈气体状态的激素,与植物衰老和成熟有关。 植物营养培养基中常用的植物生长调节剂
类别 生 长 名 称 2,4-二氯苯氧乙酸 α-萘乙酸 缩写词 2,4-D NAA IAA IBA BA KT ZT GA3 分子量 221.0 186.2 175.2 203.2 225.2 215.2 219.2 346.4 使用浓度范围 0.001-10mg/L 0.001-10mg/L 0.001-10mg/L 0.001-10mg/L 母液配制 生长素通常用NaOH溶液滴至溶解成溶液。 能溶于乙醇 说 明 IAA易被植物细胞所氧化。故培养基中很少单独使用。 素 吲哚-3-乙酸 吲哚-3-丁酸 细 胞 分 裂 赤 霉 素 6-苄基氨基嘌呤 6-糠基氨基嘌呤 N-异戊烯氨基嘌呤 (玉米素) 赤霉素 分裂素通常能溶于稀NaOH,含水乙醇或稀盐酸 能溶于乙醇 玉米素不耐热,不能高压灭菌。 不耐热不能高压灭菌在愈伤组织和悬浮培养物的启动和保持生长时才需要有时小植株再生时也需要
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二、PH的调整
培养基的PH值(酸碱度)直接影响对离子的吸收,所以过酸或过碱都对植物材料有很大影响。此外,琼脂培养基的PH值还影响到凝固情况最好用酸度计,若无也可用精密PH-试纸(干燥保存)过酸用1N NaOH调节,过碱用1N HCl调节,经高压灭菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖分解)或氧化,酸度会增加,PH一般可降低(0.2),培养基PH一般调至5.6-5.8的范围。
三、培养基中采用浓度单位计量有: 1. 毫克·升(mg/L 或mg·L-1) 每升溶液中所含某化合物的毫克重。 2. 微克·升(ug/L或ug·L-1) 每升溶液中所含某化合物的微克重。
3. 重量百分率:每100ml溶液中含某化合物的克重如:2%表示1000ml溶液中含化合物20g,采用琼脂和蔗糖时常用此单位。
4. 克分子重量(mol ·L-1即mol/L)mol
每升溶液中所含某化合物的克分子重(mol),此种单位常用于生长调节剂,按用量不同,又分毫克分子重(mmol·L-1 )和微克分子(umol·L-1)。
5. 容积百分率:100ml溶液中含有某化合物的毫升量,常用于表示椰子乳汁,番茄汁、马铃薯汁等。 三、
实验操作内容:
1. 棉球塞制作 2. 无菌接种操作练习 3. 分装培养基练习 4. 容量瓶定容练习
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实习五 培养基母液的配制
一. 培养基的种类
培养基的种类,成分直接影响到培养材料的生长,故应根据培养植物的种类、部位选择适宜的培养基。 (一) 高盐成分培养基:
包括MS、LS、BL、BM、ER等培养基,它应用最广泛,其钾盐,铵盐及硝酸盐含量均较高,微量元素种类齐全,目前植物组织快繁中,应用MS培养基最多。
(二)硝酸钾含量较高的培养基
1.B5培养基 B5培养基除含有较高的钾盐外,还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫铵素,较适应南洋杉,葡萄和大豆科,十字花科植物的培养。 2.N6培养基 N6培养基(朱至清等)1975年我国学者创造,获国家发明二等奖,适用于单子叶植物花药培养,柑桔花药培养也适合,楸树、针叶树等的组织培养使用效果也好。
3.SH培养基 此培养基是矿盐浓度较高的培养基,其中铵与磷酸是由NH4H2PO4 提供的。 (三)中等无机盐含量的培养基
1.H培养基(Bourgin与lNitsch) 大量元素为MS培养基的一半,仅KH2PO4
及氯化钙稍低,微量元素种类减少,而含量较MS为高,维生素种类比MS多,适于花药培养。
2.尼奇培养基(Nitsch) 与H培养基的成分基本相同,仅生物素较H培养基高10倍,也适于花药培养。
3.米勒培养基(Miller),Blaydes培养基适合于大豆愈伤组织培养和花药培养用。 (四)低无机盐培养基,大多数情况下用于生根培养基 1.改良怀特培养基(White) 2.WS培养基(Wolter and skoog) 3.克诺普液(sknop)花卉培养上用得多 4.贝尔什劳特液(Berthelot)
5.HB(Holley and Baker)花卉培养,木本植物的茎尖培养效果良好,其成分是
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大量元素比1/2克诺普液稍多,微量元素用贝尔劳什特液,每升培养基中加0.5ml
二.培养基的选择
所培养的植物已有前人作过研究的,可以从文献中找到可供采用的合适培养条件;若前人从未培养过,就要选择和建立一个最适于该植物的营养培养基。可采用一种已知培养基如MS、B5或SH,对少数成分进行改变;进行一系列试验,在修改一种培养基时,对无机成分和有机成分分别处理。
在植物组织培养基中最可变的因素是生长调节剂,尤其是生长素和细胞分裂素,具体方法:首先选择好一种基本培养基(MS)对生长素(NAA)和细胞分裂素(BAP)均分别制定大约五种浓度0 , 0.5 , 2.5 , 5 , 10 μmol(微克量)将这两种调节剂的五种浓度进行排列组合便可以得到25个组合的试验性培养基,从25个培养基中挑选出最好的培养条件(2) 进一步选择最合适的生长素和细胞分裂素(浓度均与最适条件浓度相同)方法是先保持其中的生长素不变。只改变细胞分裂素的类型,反之亦然。
虽然高盐培养基(MS等)从许多植物系统中已证明是良好的,但是有些培养物在低盐培养基上生长得更好,因此值得花精力去检验一下在最适生长调节剂组合下改变MS的无机盐浓度为1/2和1/4水平,从而可以找到最好的无机盐尝试和最适生长调节剂组合的营养培养基。 三.培养基母液配制
为了减少工作量,减少多次称量所造成的误差,一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液,现以MS 培养基为例,预先配制,四组不同母液,说明母液的配制方法。
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