一、填空题
1． 基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2． 基因工程的两个基本特点是： (1)____________，(2)___________。 3． 基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。
4． 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。
5． 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。
6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。
9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。
10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。 11．EGTA是____________离子螯合剂。
12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。
15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。
16．基因工程中有3种主要类型的载体： _______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DN***段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18． 一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫 。
19． pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基 因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。
20．YAC的最大容载能力是 ，BAC载体的最大容载能力是 。 21．pSCl01是一种 复制的质粒。
22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。
23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。 24． 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和 。
25． 黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、COS位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 kb。
26． 野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。
27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来自噬菌体的主要结构是 。
28．l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DN***段后，总的长度应在噬菌体基 因组的 的范围内。
29． 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 。
30． 用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc， 其目的是 。
31． 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。
32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 。 33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 。
34．乙醇沉淀DNA的原理是 。
35． 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)________________________________ (2)_____________________________ (3)_________________________________。
36． 受体细胞的感受态是___________________________________。
37． DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_____________(2)_______________ (3)___________________________(4)___________________________。
38． 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质 粒的集合体称之为构建了一个_________________。
39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个_________________。
40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。
41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。 42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为： (1)_______________(2)_______________(3)___________________ (4)____________________________等。
43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。 44． 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为__________ 探针和__________________探针。
45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。
46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)____________________________________ (2)__________________________(3)_____________________________________。
47．根据Northern杂交的结果可以说明：__________________________________________。 48．差示杂交(differential hybridization)技术需要_________________________________。 49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射DNA探针杂交的技术称_______________________。
50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。
52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_______________ (2)________________________(3)______________________。 53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
(1)_______________________________________________________________________ (2)_______________________________________________________________________。 54．放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)__________________________________ (2)___________________________ (3)__________________________________。 答案 1．70
2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达 3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．限制性酶切图谱
5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 7．EcoK；EcoRl 8．GGCC；异源同工酶
9． 枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶 10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团 11． Ca2+
12． 5'-3'合成； 3'-5'外切
13． DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶 14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平 15．核酸水解酶H；RNA
16． 质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体
17． 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入 18． 质粒消除(或治愈)
19， pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒) 20． 1000kb；300kb 21. 严紧
22． pBR322和M13；pMBl；转座子
23． 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24． 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 25．质粒；l噬菌体； 45
26． (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 27．复制区； IG区 28．75％～105％
29． 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性
30． 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力
31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析 32．T—载体
33．第二链合成时形成的发夹环? 34．乙醇使DNA分子脱水
35．(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36．接受外源DNA的生理状态
37．(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 38． 基因组DNA克隆； 基因组DNA文库 39．cDNA克隆；cDNA文库 40．聚合酶链式反应(PCR) 41．0°C；42°C
42．(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44．基因组DNA；cDNA
45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶
46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针
47．外源基因是否进行了转录
48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而 在另一个细胞群体中不能表达这些基因 49．Northern印迹 50．Southern印迹
51．5’?3’合成酶；3’ ?5’外切核酸酶
52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子
53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件
54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记
二、选择题(单选或多选)
1． 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )
A．Kornberg
W．Gilbert
P．Berg
B．McClintock
2． 第一个作为重组DNA载体的质粒是( )
pBR322
ColEl
pSCl01
pUCl8
3． 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
由作用于同一DNA序列的两种酶构成
这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4．Ⅱ型限制性内切核酸酶： ( )
有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
限制性识别非甲基化的核苷酸序列
有外切核酸酶和甲基化酶活性
