2均匀取样品5mL于编号试管中，用空白发酵液稀释至一定浓度，在○
721分光光度计上测定A600，根据菌体浓度与吸光度之间关系地标准曲线换算出菌体浓度。
3其余发酵液于3℃，2000r/min条件下离心分离8min,上清液装入编号○
三角瓶，用于测糖。 （2）测定葡萄糖
1样品处理：用蒸馏水对样品液进行稀释待用。 ○
2标定碱性酒石酸铜溶液：分别吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液和乙液，○
置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，混匀，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸腾，趁沸以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。 3样品溶液预标定：分别吸取○
5.0mL碱性酒石酸铜甲液和乙液，置于
150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，混匀，控制在2min内加热至沸腾，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
4样品溶液测定：分别吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液和乙液，置于150mL○
锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，混匀，从滴定管滴加比预滴定体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸腾，趁沸继续以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作3份，得出平均消耗体积。 结果计算：还原糖（以葡萄糖计，g/L）?c?V?N，式中： V1c ——葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL；
V ——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL； V1——测定时平均消耗样品溶液体积，mL； N ——被测样品稀释倍数。 6.放罐
（1）发酵8小时后，测OD值及还原糖量，当发酵液的PH不断上升且为碱性、
OD值增长缓慢，且还原糖量很低时，可判断发酵结束，准备放罐。
（2）放罐操作同取样。将全部发酵液取出后，100℃煮沸10分钟灭菌，灭完菌的发酵液可排放入下水道。 7.清洗
（1）放罐完毕后，打开自来水进水口，往发酵罐中注满水，同时开动搅拌轴搅动清洗五分钟，排水。
（2）再次注入自来水清洗，操作如1。 （3）清洗结束，关闭电源。 7.清洗
（1）放罐完毕后，打开自来水进水口，往发酵罐中注满水，同时开动搅拌轴搅动清洗五分钟，排水。
（2）再次注入自来水清洗，操作如1。 （3）清洗结束，关闭电源。
二、 实验结果与分析
1.发酵过程数据结果
⑴每小时记录发酵过程温度、PH值、DO、通风、转速的测定数值，结果如下表：
发酵时间 时间温度℃ h 空白 37.0 pH值 DO % 通风L/min 转速 r/min 消泡 取样mL 值班人 7.00 100.0 2-3 300 250 8:20 0 37.0 7.00 95.0 2-3 300 50 9:20 1 36.9 6.94 76.1 2-3 300 50 10:20 2 36.9 6.93 26.7 2-3 300 50 11:20 3 36.9 6.95 30.1 2-3 300 50 12:20 4 37.0 6.97 8.7 2-3 300 50
13:20 5 36.9 6.98 5.7 2-3 300 50 14:20 6 36.9 6.99 0.6 2-3 300 50 15:20 7 36.9 7.36 1.4 2-3 300 50 16:20 8 36.9 7.59 7.0 2-3 300 50 17:20 9
⑵大肠杆菌标准曲线绘制如下所示： 两者的关系曲线图1，如下图：
图1 菌液OD值与干菌体浓度关系图
大肠杆菌菌体干重与吸光度间的关系
1.61.41.210.80.60.40.200y = 1.1658x + 0.0989R2 = 0.9832OD值0.51菌体干重（g/L）1.5得大肠杆菌干菌体浓度X 与菌液OD值y之间的关系为：
y=1.1658X+0.0989 则X=(y-0.0989)/1.1658
⑶测定不同时间发酵液的OD值，确定对应时间的菌液浓度，结果如下表：
表 3 发酵液OD值与菌液浓度关系表
样品 空白对照 0 1 2 3 4 5 6 7 8 稀释度 1 1 2.2 6.6 18 30 55 66 66 66 OD值 0.628 0.845 0.98 0.949 0.869 0.855 0.795 0.777 0.756 0.748 X=(y-0.0989)/1.1658 0.454 0.064 0.756 0.729 0.661 0.649 0.597 0.582 0.564 0.557 干菌体浓度 0.454 0.640 1.663 4.813 11.890 19.457 32.841 38.390 37.201 36.748
⑷测定不同时间发酵液的葡萄糖浓度，结果如下表：
表4 培养液中葡萄糖含量表
编号 稀释倍速 预测X0 测定X1 测定X2 测定X3 平均体积 葡萄糖浓度 10.80 10.90 10.90 标定 0 18 10.51 10.97 10.92 10.42 10.770 18.162 1 15 9.25 9.06 9.62 9.40 9.360 17.415 2 13 8.62 8.62 8.56 8.51 8.563 16.497 3 10 8.70 8.35 8.70 8.80 8.617 12.611 4 7 9.00 8.70 8.80 8.75 8.750 8.693 5 3 7.23 6.78 6.88 7.32 6.993 4.662 6 2 9.75 9.20 9.55 9.12 9.290 2.339 7 1 10.22 9.85 10.30 9.88 10.01. 0.857 8 1 10.37 10.10 10.17 10.68 10.317 0.550 编号7、8反滴定 2. 数据整理及分析
将数据处理之后，整理成下表：
发酵过程各参数数据表 发酵时间h 0 1 2 3 4 pH 70.00 69.40 69.30 69.50 69.70 DO值% 干菌体浓度（×0.1）g/L 95 76.1 26.7 30.1 8.7 6.4 16.63 48.13 118.9 194.57 葡萄糖浓度（×1/6）g/L 108.97 104.49 98.98 75.67 52.16
