不同的碳源对菌体生长和外源基因表达有较大影响：使用葡萄糖和甘油菌体比生长速率和呼吸强度相差不大。葡萄糖对lac启动子有抑制作用。用甘露糖做碳源不产生乙酸。乳糖启动子使用乳糖作碳源较为有利，乳糖同时还起诱导作用。
无机磷的影响：过量的无机磷会刺激葡萄糖的利用、菌体生长和氧消耗。在低磷浓度下，尽管最大菌体浓度较低，但产物比产率及产物浓度都最高。启动子只有在低磷酸盐的情况下才被启动。
温度的影响：温度对基因表达调控作用可发生在复制，转录，翻译或小分子调节分子合成水平上。
大肠杆菌合成青霉素酰化酶不仅受苯乙酸诱导和葡萄糖调控，而且受温度调控。是由于影响了细胞内青霉素酰化酶mRNA的浓度。
十五、如何建立基因工程菌分离工艺
一、建立分离纯化工艺需了解的各种因素：
1，含目的产物的起始物料的特点。1）菌种类型及其代谢特性。2）原材料和培养基的来源及其质量。3）生产工艺和条件。4）初始物料的物理化学和生物学特性。 2，物料中杂质的种类和性质。 3，目的产物特性 4，产品质量的要求。
二、分离纯化的基本过程：细胞破碎，固液分离，浓缩与初步纯化，高度纯化直至得到成品，成品加工。 细胞破碎的方法：机械法-非机械法；物理法（匀浆法、珠磨法、超声法），化学法（渗透冲击、增容法），生物法（酶溶法）。
固液分离常用方法：离心沉淀，膜过滤，双水相萃取。
三、选择分离纯化方法的依据： 1根据产物表达形式来选择。
2根据分离单元之间的衔接选择。应尽早采用高效分离手段，将含量最多的杂质先分离去除，将最昂贵最费时的分离单元放在最后阶段。色谱分离次序的选择同样重要，经盐析后的液体不适宜于离子交换层析，但对疏水层析则可直接应用。离子交换、疏水及亲和色谱通常可以起到蛋白质的浓缩的效应。亲和层析选择性最强，多放在第二步以后。
3根据分离纯化工艺的要求来选择
1）应具有良好的稳定性和重复性。2）尽可能减少组成工艺的步骤。3）组成工艺的各技术或步骤之间要能相互适应和协调，工艺和设备相适应。4）在工艺过程中尽可能少用试剂，尤其是对稳定性差的产物。5）分离纯化工艺所用的时间尽可能短，尤其是对稳定性差的产物。6）工艺和技术必须是高效，收率高，易操作，对设备条件要求低，能耗低。7）具有较高的安全性。
四、分离纯化的技术要求：1技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性。2选择性要好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分离出来，达到较高的纯化倍数。3收率要高。4两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整。5整个分离纯化过程要快，能够满足高生产率的要求。
十七、包含体的分离、溶解和复性：
细胞破碎→固液相分离→去污剂或低浓度尿素或盐酸胍去除可溶性蛋白和膜蛋白→高浓度尿素或盐酸胍溶解包含体，DTT打开二硫键→逐步透析或稀释去除变性剂。
第三章 动物细胞工程制药
一、 如何选择培养基（简答题）：培养基的基本要求：营养成分，促生长因子，激素，渗透压，PH，无毒无污染。 1建立某种细胞株所用的培养基应该是这种细胞首选的培养基，查阅参考文献，根据细胞株建议的培养基。 2根据细胞株的特点和实验要求选择培养基。
3用多种培养基培养目的细胞，观察生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择效果好的。
二、 天然培养基：血清：
成分：由血浆去除纤维蛋白而形成的，血清中含有各种多肽，脂肪，碳水化合物，生长因子，激素，无机物等。 作用：1提供基本营养物质。2提供激素和各种生长因子。3提供结合蛋白。4对培养基中的细胞起到某些保护作用。 质量标准：取材对象。取材过程。促生长效果。克隆形成率。贴瓶率测定。续传代培养。
外观：透明清亮，土黄或棕黄色。无沉淀或极少。浑浊沉淀多→蛋白质变性。棕红色→取材时有溶血现象。液体稀薄→掺入生理盐水过多。
三、 合成培养基：人工设计，配制的培养基
基本培养基：优点是成分明确，组分稳定，可大量生产。氨基酸、维生素、糖类、无机盐、其他成分（酚红指示剂）。 无血清培养基：即不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间繁殖的合成培养基。HamF12与DMEM1：1混合。优点是1提高了细胞培养的可重复性，避免了血清批次之间差异的影响。2减少了有血清带来的病毒真菌支原体等微生物污染的危险。3供应充足，稳定。4细胞产品易于纯化。5避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性。6减少了血清中蛋白对某些微生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。 无蛋白培养基：不含有动物蛋白的培养基
限定化学成分培养基：指培养基中所有成分都是明确的
平衡盐溶液：由无机盐，葡萄糖组成。维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其它试剂。
消化液：用于取材进行原代培养时需要将组织块消化解离形成细胞悬液。传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来。EDTA溶液（破坏细胞间的连接），胶原酶溶液（上皮类细胞原代培养时使用），胰酶溶液（消化酪蛋白） 添加的抗生素：青霉素（革兰阳性菌），链霉素（革兰阴性菌） 细胞营养污染的原因途径：空气，器材，操作，血清，组织样本。 污染补救措施：抗生素排除法（有价值的细胞），加温除菌（支原体污染），动物体内接种（肿瘤细胞），与巨噬细胞共培养
第四章 抗体制药
一．单克隆抗体：将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞体系，此细胞系能产生结构和特异性完全相同的高纯度抗体。是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞产生的，故称单克隆抗体。（高度特异性，均一性，有稳定来源可大量生产） 二． B淋巴细胞及特点：
三． 骨髓瘤细胞及特点： 四． 利用HAT筛选机理：1体内合成DNA两途径（主要 旁路）2HAT中有氨基蝶呤，抑制主要途径，可以利用
另两个成分旁路合成DNA，正常的B细胞有旁路途径，而肿瘤细胞没有旁路途径，B细胞与肿瘤细胞融合后有B细胞的旁路途径，比B细胞长命，所以可以存活。 五． 人-鼠嵌合抗体：在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链H和轻链L可变区分离出来，分别与人Ig的重链和
轻链的稳定区C基因连接成人-鼠嵌合体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人-鼠嵌合抗体。 六． 改形抗体：用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中的CDR序列，则可使人的Ig分子具有鼠源性单
克隆抗体的抗原结合的特异性，抗体分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫原性。这种改形抗体又称CDR移植体。 七． Fab与Fv抗体：用胃蛋白酶可将IgG的重链在铰链区的C端处裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段，由
于仍保持抗体分子的立体构型，因此在人体仍然很稳定，成为小分子抗体的雏形，称Fab抗体。具有与完整抗体相似的结合能力的抗体可变区片段称为Fv抗体 八． 单链抗体：是由一段弹性连接肽把抗体可变区重链与轻链相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最
小功能结构单位。优：分子小，易于分子改造，半衰期短，免疫原性低。缺：稳定性低。功能单一。亲和力低。
九． 细胞内抗体：
十． 噬菌体抗体库技术 特点：1模拟天然全套抗体库。2避开了人工免疫和杂交瘤技术。3可获得高亲和力的人源
化抗体。 十一． 噬菌体表面转释技术
十二． 获取目的基因的方法
十三． 淘筛：基本过程：抗原固化，对噬菌粒群的吸附、洗涤、洗脱和感染扩增，与辅助噬菌体超感染获得大容量
次级文库，再反复与抗原吸附，淘汰了非目的克隆，使目的克隆大量地扩增。 十四． 诊断血清的制备：1制备细菌抗原。2免疫动物和制备抗体血清。 十五． 抗体治疗药物有哪些：放射性同位素标记的抗体治疗药物，抗癌药物偶联的抗体药物，毒素偶联的抗体药物。
第六章 酶工程制药
一、酶和细胞的固定方法：
载体结合法：物理吸附法。离子结合法。共价结合法。优缺点
交联法：交联酶法。酶-辅助蛋白交联法。吸附交联法。载体交联法。 包埋法：网格型，微囊型。
