实习二 营养培养基配制
一、培养基母液配制
为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液，现以MS 培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母液的配制方法。
MS培养基母液配制（单位：毫克 mg）注意：
1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物分别置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，混合定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中加热，不断搅拌，溶解后两液混合，调PH 5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
6.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
7.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
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母液 编号 I 种类 大量元 成 分 规定量 浓缩 倍数 称取量 母液 体积 配制1升培养基吸取量定容 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 37.3 27.8 2.0 0.5 0.1 0.5 10 10 10 10 10 100 100 100 100 100 100 100 100 100 50 50 50 50 2
19000 16500 3700 1700 4400 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 3730 2780 100 25 5 25 1000 100 素 KH2PO4 CaCl2·2H2O II 微量元素 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O H3BO3 KI Na2MoO4·7H2O CuSO4.5H2O4 CoCL2.6H2O 铁Na2-EDTA 100 10 1000 10 盐 FeSO4.4H2O 甘氨酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫铵素 烟酸 500 10 III 有机物
肌酸 二、养培养基配制程序
100 50 5000 (一)母液吸取量的计算
配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积×——————————
母液浓缩倍数
培养基要求的含量
公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二） 各种母液按顺序编号排列
A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐； E.有机物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G.细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
(三) 配制培养基
1.称取5-7g琼脂，30g蔗糖加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 2.各种母液的吸取
用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml
用2ml移液管吸取生长素NAA1.5ml；用0.5ml移液管吸取KT0.5ml
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，定容至1000ml，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。
二、分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装70支试管，即每支试管15ml左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿
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碰试管壁。
三、包装：分装好的试管用棉塞塞上，包上包装纸，每5~7支试管捆成一扎，标明培养基代号即可进行灭菌。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
附：几种常用药剂的配制
（一）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。学习配制70%和75%酒精。 （二）消毒剂
1.20%次氯酸钠溶液 称取20g次氯酸钠用少许水溶解，100ml水定容。 2.0.1%升汞（HgCl2）溶液 称取0.1g HgCl2少许水溶解，100ml水定容。 （三）1摩尔浓度(mg/L )NaOH 和1摩尔浓度（mg/L）HCl配制。
摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。用M表示。
1.NaOH摩尔浓度（M） NaOH摩尔质量=分子克数=40g
1M NaOH是指1000ml溶液中含有40克摩尔质量的NaOH，现要配制100ml 40×0.1＝4g
称取NaOH4g，用少量溶解，定容100ml. 2.HCl的摩尔浓度
具体配制酸的mol浓度时，应考虑原浓酸的比重mol浓度。 要求配制的mol浓度×需配制的体积×原酸分子量 V＝——————————————————————— 原酸的百分浓度×原酸的比重×1000
配制1.0M HCl 100ml，量取38%，比重为1.19的HCl8.06ml加蒸馏水，定容至
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