5 提取物理化性质的研究
提取物及其主要有效成分的基本物理化学性质决定了辅料的选择，同时决定了它在皮肤内的转运速度，以及制剂的稳定性和药效，因此对提取物及其主要有效成分的一些基本性质如溶解度、分配系数等的考察是对药物释放性能和皮肤渗透性研究的基础，也是进一步开展药物处方设计和筛选的依据。本文采用了沉淀法和指标成分溶解量法来研究丹黄凝胶提取物在透皮制剂常用试剂中的溶解情况，且对提取物中指标成分大黄酚和小檗碱的油/水分配系数进行了测定，以期为丹黄凝胶剂处方设计及制备提供参考依据。 5.1 丹黄凝胶提取物溶解性能考察[35，36] 5.1.1 实验原理与方法
5.1.1.1沉淀法原理与操作方法
本方法主要是在一定温度下(本实验考察温度为25士2℃)，通过向一定量溶剂中加入过量溶质，进行溶解，过滤并恒重未溶解溶质，计算溶解量。计算公式:溶解量=(W溶质加入量-W未溶解溶质量)/V溶剂体积。
分别取丹黄凝胶提取物0.29，精密称定，置25mL容量瓶中，分别加入不同的考察溶剂水、生理盐水、无水乙醇、异丙醇、乙酸乙酷、丙二醇及不同pH值的磷酸盆缓冲溶液(PBS)适量，超声20min，冷却至室温下定容，摇匀，离心，滤过，沉淀物于50℃真空干燥箱中烘干恒重，计算溶解量。 5.1.1.2指标成分溶解量法原理与操作方法
本方法主要通过运用高效液相色谱测定丹黄凝胶方提取物中指标成分大黄酚和小檗碱在不同溶剂中的溶解情况，进而判断丹黄凝胶方提取物在不同溶剂中的溶解性能。分别精密吸取上述沉淀法过滤后的上清液2mL，置 10mL容量瓶，加甲醇适量，超声10min，放至室温，定容，8000r/min离心10min，取上清液20μL，按上述提取液含量测定色谱条件进行测定，计算指标成分的溶解量。 5.1.2溶解性能测定结果 5.1.2.1沉淀法测定结果
沉淀法测得丹黄凝胶提取物在不同溶剂及不同pH值的磷酸盐缓冲溶液 (PBS)中的平衡溶解度，结果如表8和13。
表8提取物在不同溶剂中的溶解量(n=3)
表9在不同pH值PBS中的溶解量(n=3)
结果表明，在不同溶剂中丹黄凝胶提取物的溶解度依次为:丙二醇>水>生理盐水>无水乙醇>乙酸乙醋>异丙醇，而在不同pH值PBS中的溶解度随着pH的升高先增大后减小，其中在pH值为7.02的PBS中溶解度达最大。 5.1.2.2指标成分溶解量法测定结果
指标成分溶解量法测得大黄酚和小檗碱在不同溶剂及不同pH值的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中的溶解情况，结果见图3、4。
图3大黄酚和小檗碱在不同溶剂中的溶解量
图4大黄酚和小檗碱在不同pH值PBS中的溶解量
由图3可知，不同溶剂对大黄酚的溶解能力为:丙二醇>无水乙醇>异丙醇>乙
酸乙酷>水>生理盐水，对小栗碱的溶解能力为:丙二醇>无水乙醇>异丙醇>生理盐水>水>乙酸乙酷；从图4可以看出，两个指标成分大黄酚和小檗碱在不同pH值PBS中的溶解度均随着pH的升高先增大，升至pH为7.02时最大，之后下降。 5.2 提取物中大黄酚和小檗碱的油/水分配系数测定
药物的理化性质与其透皮速率常数之间有密切的关系，药物的结构、分子量、溶解度、油/水分配系数等都可影响药物的透皮吸收，其中药物的油/水分配系数是影响药物经皮吸收的主要因素之一。皮肤一般被认为是非均相结构，由亲脂性的角质层和亲水性的活性皮肤层(表皮和真皮)组成。角质层似类脂膜，在细胞间隙内充满了固醇、脂肪酸和脂质，而在细胞膜内也含有若干类脂，故角质层整体上为疏水性，因此脂溶性大的药物易通过角质层。药物穿过角质层后，需分配进入活性表皮继而被吸收，因活性表皮主要是水性蛋白溶液，水分含量约占90%，因此脂溶性太大的药物难于分配进入活性表皮，故药物的油/水分配系数要适中。
有许多种有机溶剂可作为药物油/水分配系数测定的油相，如正辛醇、已烷、正丁醇等，但应用最多的是正辛醇。一般认为正辛醇有许多性质与生物大分子相似，如细胞类脂膜的溶解度参数δ=10.3，而正辛醇的溶解度参数δ=10.24，与细胞类脂膜的溶解度参数相近似；同时正辛醇在形成氢键时既可以作为质子受体，又可以作为质子给予体，可以饱和一定量的水。并且大多数药物的溶解度参数δ为8—12，只有少数药物不在此范围内，而正辛醇的溶解度参数正好位于一般药物溶解度参数范围的中值左右，所以认为药物在正辛醇中可形成近似的理想溶液。因此，本实验选择了正辛醇作为油相，研究丹黄凝胶提取物中指标成分大黄酚和小檗碱的油/水分配系数，并选择最为常用的摇瓶法进行试验。 5.2.1 实验方法[37-39]
选择正辛醇为油相，pH5.05、pH6.00、pH6.99、pH8.03、pH9.04的磷酸缓冲盐溶液(PBS)及蒸馏水为水相。取适量丹黄凝胶提取物 (0.2g)溶解于被水饱和的正辛醇中，制成提取物的正辛醇溶解，精密吸取该溶液lmL置于10mL具塞塑料管中，再分别加入用正辛醇饱和的水及不同pH值的磷酸盐缓冲溶液(PBS)5mL，将此溶液置于(37士1)℃恒温台式摇瓶机中(转速100rmp)，振摇7h直至平衡，以8000r?min-1离心l0min，分别取上层(油相层)和下层(水相层)溶液各0.5、1mL，置5mL容量瓶中，用甲醇超声并定容，取样以4000r/min离心10min，取上清液20μL，按提取液含量测定方法进样测定，记录峰面积并计算浓度。 5.2.2数据处理
表观油/水分配系数计算公式为：P=A0/AW
其中P为分配系数，A0为油相中药物的活度，AW为水相中药物的活度。当药物在两相中的浓度比较烯，则可以用浓度来代替活度，公式为: P=C0/CW
公式中C0为油相中药物的浓度，CW为水相中药物的浓度。 5.2.3实验结果
大黄酚和小檗碱在不同pH条件下的表观分配系数测定结果见表10和图5。
表10大黄酚和小檗碱的表观油/水分配系数测定结果(n=3)
图5大黄酚和小檗碱的表观油/水分配系测定结果
从表10和图5的结果可以看出，指标成分大黄酚的油/水分配系数随pH值升高而减小，但变化并不大，可能是在低pH值条件下大黄酚主要以分子形态存在，亲脂性较强，随着pH值的升高部分以离子态存在；而小檗碱的油/水分配系数随pH值升高而增大，且变化较大，可能是酸性条件下小檗碱主要以离子态存在，亲水性较强，随着pH值升高逐渐转化就分子形态，亲脂性增强。药物要具有一定的脂溶性和水溶性是透皮吸收的关键所在，本实验结果表明大黄酚和小檗碱的极性受pH值影响较大，因此调节指标成分供药体系的pH值将会使之具有更好的透皮效果。
6 体外透皮与释放的研究方法的建立
透皮速率与释放度是评价经皮给药制剂生物利用度的重要方法及指标。在丹黄凝胶剂成型工艺研究过程中，需运用凝胶剂中指标成分的透皮速率和释药特性来考察制剂工艺，并筛选出凝胶剂的辅料及其用量，为凝胶剂的处方优化提供依据，因此必需建立适合体外透皮与释放研究的方法。 6.1 体外透皮试验方法建立 6.1.1透皮扩散试验装置
透皮扩散池基本结构是由一个供给室和一个接受室组成的双室装置，在两个室之间夹有皮肤样品或TDDS系统及其它研究材料，在供给室内装有待扩散药物，在接受室装有接受介质，根据研究目的可以设计或选用不同类型的扩散池。本实验采用了自制改良的Franz扩散池(见图6)，其参数为:扩散面积3.14cm2，扩散池容积为17.0mL。
