常用植物生理指标测定方法
一、可溶性蛋白质含量测定——考马斯亮蓝G25O染色法
1.牛血清白蛋白标准曲线制作：称取25mgBSA加蒸馏水定容至100ml。吸取40ml+H2O定容至100ml，即得100ug/ml标准BSA溶液，按下表制作BSA标准曲线： 试管编号 1 2-1、2 3-1、2 4-1、2 5-1、2 6-1、2 BSA标液0 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0 （ml） H2O（ml） 3 2.4 1.8 1.2 0.6 0 蛋白质浓度0 20 40 60 80 100 （ug/ml） 考马斯亮3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 蓝G25O染色液 2.考马斯亮蓝G25O染色液：称取100mg考马斯亮蓝G25O溶于50ml乙醇中，加入100ml85%（w/v）磷酸（高氯酸？），加H2O定容至1000ml，贮于棕色瓶中。 3.样品的提取：称取鲜样0.25~0.5 g，+5mlH2O研磨匀浆，3000r/min离心10min，上清液备用。适当稀释3ml，加入考马斯亮蓝G25O染色液3ml，摇匀，10min比色（595，620？）。
4.可溶性蛋白质含量（ug/g）= c（ug/ml）*v定容（ml）*N(稀释倍数)/w（g）
二、可溶性糖含量测定——蒽酮法
1. 蔗糖标准曲线制作：称取80℃烘干的分析纯蔗糖1.0000g，加H2O溶解转入100ml容量瓶定容，吸取1ml于另一容量瓶加H2O定容100ml，即得100ug/ml糖液，按下表制作糖标准曲线：OD=0.0092c+0.0178 试管编号 1 2-1、2 3-1、2 4-1、2 5-1、2 6-1、2 糖标液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 H2O（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 糖浓度0 10 20 30 40 50 （ug/ml） 硫酸蒽酮试剂 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 5ml 摇匀，缓慢加硫酸蒽酮试剂5ml，沸水浴10min冷却620nm比色。 2．蒽酮硫酸试剂：分析纯蒽酮1g，浓硫酸
3.样品提取：称取样品0.1~0.3g，加H2O 10ml薄膜封口，沸水浴提取30min，过滤于50~100ml容量瓶，反复漂洗，定容，摇匀静置，取上清液0，5ml加水1.5ml摇匀，缓慢加硫酸蒽酮试剂5ml，沸水浴10min冷却620nm比色。 4.可溶性糖含量（%）=c（ug/ml）*v定容（ml）*N(稀释倍数)/w（g）*10000
三、脯氨酸含量测定——磺基水杨酸法
1. 脯氨酸标准曲线制作：称取0.0250g分析纯脯氨酸加250ml H2O即得100ug/ml标液，取10ml加水定容至100ml，得10ug/ml脯氨酸标准液，按下表制作标准
曲线：OD=0.0032C-0.0072 试管编号 1 2-1、2 3-1、2 4-1、2 5-1、2 6-1、2 7-1、2 10ug/ml PRO标液0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 （ml） H2O（ml） 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 PRO浓度（ug/ml） 0 1 2 4 6 8 10 冰乙酸 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 酸性茚三酮 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 3ml 摇匀沸水浴30min冷却，加5ml甲苯剧烈震荡萃取静置，520nm比色。 2试剂：
3%磺基水杨酸称取：3g磺基水杨酸+H2O定容100ml
酸性茚三酮试剂：2.5g茚三酮+60ml冰乙酸+40ml 6M磷酸，70℃加热溶解冷却，棕色瓶中备用。现用现配。
3．样品提取测定：称样0.2g左右3次重复→具塞试管→5ml3%磺基水杨酸（或薄膜封口）→沸水浴15min冷却，上清液+2ml冰乙酸+3ml酸性茚三酮→摇匀封口沸水浴30~45min，冷却（甲苯萃取）→静置520nm比色。
四、丙二醛含量测定——硫代巴比妥酸（TBA）法
1.用10%三氯乙酸（TCA）配置0.67%的TBA 2.5%TCA
3.样品测定：称取0.5g样品加5ml5%TCA研磨成匀浆→3000r/min离心10min→上清液2ml+0.67% TBA 5ml,封口沸水浴15分钟，冷却,再离心4000r/min10分钟比色（有絮状物时过滤）分别测定450、532、600nm处的OD值代入下列公式：CMDA(mmol.L-1)=6.452(OD532-OD600)-0.559OD450, MDA含量（mmol.g-1）= CMDA(mmol.L-1)V提取液/V测*W
称样1.0g左右，SiO2少许和7.8的磷酸缓冲液冰浴研磨成匀浆转移25ml容量瓶定容，4℃10000r/min离心15分钟，上清液备用同时做MDA、SOD、POD
五、POD的测定——愈创木酚氧化法
PBS（PH5.0）1ml+1ml愈创木酚+0.5ml水+0.5ml酶液混匀倒入比色杯中，加入0.08%H2O2立即计时，读取每分钟OD470值，共计5分钟，以0.01为一个酶活单位U.g-1fw.min-1 (还是0.08%H2O2？)
六、SOD的测定——氮兰四唑（NBT）法
PBS（PH7.8）3ml+0.6mlMet+0.6mlNBT+0.6ml核黄素+TDTA-Na0.6ml+水1.0ml +0.2ml酶液混匀照光计时反应20分钟时，读取OD560值
