会生长增大而容易鉴别。 2.1.4 无菌室方面造成的误差
在需要进行菌种处理和微生物鉴别时，应在半无菌室进行，严禁在微生物检查用洁净室操作，否则，将会导致试验室环境污染或菌种之间的交叉污染[13]。 2.1.5 被测药物性质的影响
供试液的制备按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制成供试液。制备供试液时，力求均匀分散。因为测定中一个细菌可能繁殖成一个菌落，而一群也可能只形成一个菌落，测定时与匀质方式、条件关系极为密切，分散充分时，菌落生长数多，反之菌落数就少。 2.1.6抽样
抽验部分样品推断整批药品的微生物质量，是药品微生物限度检验的基本任务。药品微生物检验不同于化学药品的含量测定，因为污染于药品中的微生物具有特殊性:第一，药典中以活的微生物作为检验对象。第二，分布的不均匀性。在一个批号内产品有的被污染，有的不被污染，分布不匀，在被污染的部分中，有的数量极多，有的较少，种类上可以复杂或较单一。这种不均匀性源于污染原的复杂性，有原辅料污染、工艺污染、空间污染和操作人员污染等等构成污染量的多少差异，形成不均态。再者，微生物具有族团性，族团大小、紧密程度是可遗传的，族团的分散性差异极大，该特点无疑强化了不均匀性。正因为以上这些特点，抽样方法、抽样数量、抽样次数等抽样状况很大程度上决定着检验的结果遵循随机原则的概率抽样可以保证抽选出代表性较高的样本，使样品具有代表性，保证样本推论总体的可靠性[14]。
2.2微生物限度检查方法验证与评价[15]
从保证药品安全性的实际出发，不同品种需要选择建立各自适当的检查方法，包括仿制药。由于不同生产企业采用的工艺、辅料等的不同，其产品可能表现出不同的抑菌特性，进行微生物限度检查时，具体的检查方法也不能简单地照搬，需要通过试验验证核实已有的试验方法和检测系统是否适用，因此，也需要进行必要的方法验证。 2.2.1方法验证的重点
2.2.1.1验证制成适宜供试液的前处理方法，证明方法对微生物生长、检出无影响。
2.2.1.2验证样品有无抑菌性、抑什么菌、最敏感的菌是那一个，其结果将直接影响后续检验方法的选择和操作步骤的进行，同时是最终所选检验方法和操作步骤合理性的证明。
2.2.1.3验证消除样品抑菌性的方法，证明方法的有效性及方法对污染菌生长无影响；如何选择合理、适宜、简单有效的消除抑菌性的方法是当前验证工作的关键。
2.2.2方法验证中应注意的问题与评价要求
2.2.2.1验证试验的完整性验证试验的完整性与方法的科学性密切相关，验证工作不完整，就不能全面体现供试品和试验过程对微生物的影响情况，则很可能影响或干扰对最终试验结果的判断。故应按照《中国药典》2010 年版的要求进行方法验证。特别是对某些具有抑菌性的供试品，需采取适当的方法消除或有效降低供试品的抑菌性。在对供试品进行特殊处理时，既要考察供试品的抑菌性，还要考察在供试液制备过程中微生物受影响的程度（稀释剂对照组）。 2.2.2.2试验操作方法
《中国药典》2010年版微生物限度检查法包括平皿法和薄膜过滤法。薄膜过滤法采用大取样量集菌的方法，具有代表性，不易漏检，操作简单；全封闭的过滤系统，避免了操作过程中外源性细菌的污染，对试验结果可信性影响较小。故尽量采用全封闭的薄膜过滤法。 2.2.2.3样品的前处理
样品的前处理可采用溶解、乳化、破乳、稀释、离心等方法，也可几种方法联用，但需说明采用的处理方法的理由，并证明所用处理方法对各试验菌的生长无影响。对非水溶性的供试品，如果溶解冲洗不完全，会影响试验结果；故应注意使用加入适量的聚山梨酯80或其他适宜的乳化剂和稀释剂，或用十四烷酸异丙酯处理油类供试品等。 2.2.2.4方法的再验证
建立微生物学检查方法时必须进行方法学验证，以证明所采用的方法适用于该药品的生物学检查。如果产品的组分或原检验条件发生改变时，应考察改变对微生物生长的影响，并进行方法的再验证；目的是考察验证结果的稳定性并及时发现影响微生物生长的因素。
2.2.2.5质量标准中【微生物限度】项下内容的撰写建立微生物学检查方法时必须进行方法学验证，并应将验证的方法描述在质量标准中【微生物限度】项下。不同处方工艺制剂的微生物学检查方法和检验条件不同，只有将经过验证确认可行的检验方法和检验条件完整描述在质量标准中，实验人员才能进行微生物限度检查操作。
2.2.3对方法验证结果和验证报告的评价 通过所报的敏感菌来验证检查结果的可靠性。首先应按给药途径确定品种应符合无菌检验还是微生限度检查，确定验证项目。如应进行微生物限度检查，确定该品种规定的微生物限度标准，再确定应验证哪些项目。样品的前处理方法应合理，并有采用方法不影响微生物生
长的证据。对供试品的抑菌性、抑什么菌、最敏感菌是那个，应有依据或试验结果来证明；如证明供试品有抑菌性，应验证所选消除抑菌性方法的合理性和有效性。判断经验证所确定的检验方法和试验条件是否能满足最敏感菌的要求。 2.3小结
《中国药典》2010年版及以前的版本虽然收载了微生物限度检查法，但仍需明确对检验方法进行必要的方法学验证。2010年版《中华人民共和国药典》收载了药品微生物限度检查法，但随着应用，存在着影响药品微生物限度检验导致结果误差因素，在今后的检验中我们在进行药品微生物限度检验时应严格无菌室消毒管理，对检验中所有使用的器具进行彻底灭菌处理，重视培养基质量和供试液制备过程的影响，评估被测药物性质对检验结果的准确性影响调整检测方法，认识和防止菌落计数误差；消除误差影响因素，以减少和防止药品微生物限度检验误差的发生。
灰黄霉素为抗真菌类药物主要对毛发癣菌、小孢子菌、表皮癣菌等浅部真菌有良好抗菌作用，临床应用较好，且不良反应发生率低，安全性高；经验证的微生物限度检查方法能很好的检验产品的受污染程度，有效的保证了产品的质量。
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