第十四节 临床结局的判断标准规范
生化妊娠：胚胎移植后14天血HCG≥10 miu/ml（酶联免疫）,或尿HCG阳性，提示生化妊娠。
生化妊娠率=生化妊娠数/ET周期数。
临床妊娠：胚胎移植后28天，B超见孕囊，确诊为临床妊娠。 临床妊娠率=临床妊娠数/ET周期数。
第十五节 复诊病人处理
当患者在本中心有两次IVF-ET失败病史时，在申请第三次行IVF-ET治疗时，治疗方案必须在包括临床医生、实验室工作人员、护理人员的讨论会议上制订。
二次IVF超排周期之间的间隔要大于3个月。
前次常规IVF受精率<30％或完全不受精时，再次IVF治疗时，应先调查可能的不受精原因，必要时行ICSI操作。
对复诊病例，接诊医师必须详细重温原病历，进行必要的检查以确定新的治疗方案，若发现问题及时向上级医师汇报并详细记录。
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第二部分 培养室操作常规
第一节 进出培养室须知
1、非本室工作人员未经同意不得进入培养室。 2、进入培养室的人员须严格遵守培养室制度。
3、入培养室前须换洗手衣，戴口罩、帽子，用肥皂洗手后再穿手术衣，并换培养室专用拖鞋，用75%酒精擦手，待手完全干后方可入培养室。
4、培养室工作人员完成当天工作后，在所有操作台上无卵子及胚胎情况下才可进行台面消毒清洁；用75%酒精纱布擦拭（注意不要用太湿的75%酒精纱布）；在中午离开前的清洁工作不用75%酒精擦拭而用超纯水；离开培养室前，要关掉所有显微镜的电源开关。
第二节 材料的基本要求
1、与配子或胚胎接触的材料须经证实对胚胎无毒、无污染。 2、实验室应建立常规的质控方法和操作规程，并能提供有关记录。
3、所有商品培养试剂都须具备产品代号、生产日期、胚胎毒性试验结果、渗透压、PH、过期日期等资料。
4、分装试剂须注明分装日期及原试剂所注之各项资料。 ①必须在恰当保存条件下保存所有物品。
②原装培养液等液体试剂开封后，恰当保存条件下使用期不得超过1个月。 ③必须使用专供人类IVF-ET的各种商品试剂，并具备进货途径的凭据和记录。自配试剂在冷藏条件下，使用期不得超过1周。
第三节 培养基接收及放置
1、接受培养基时，应注意输送箱内是否有冷藏，并核对培养基种类、数目和培养
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基的有效期。
2、将培养基外包装用75%酒精纱布擦拭，再用消毒纱布擦干后放入冰箱。 3、如有不同供应商的培养基，则应明确标明，分别放置，并告知所有培养室工作人员。
4、不同有效期的同一类培养基不能混合放置。
5、已过有效期的培养基如不丢弃则应另外放置并明确标记。
6、培养基接收者在记事本上记录所接收培养基的供货商、培养基名称数量、培养基有效期、接收日期并签名，所有特殊情况均需记录。
第四节 培养箱
1、培养室工作人员每天早上进入培养室前先到气瓶间检查CO2气瓶的压力，进入培养室后要先进行培养箱监测，培养箱监测应一天进行1次。
2、每天监测的内容记录在专用的记录表上并签名。
根据培养基型号的不同CO2浓度应在5%~5.5%，温度应为37°C±0.1。如超出该范围需对培养箱进行校正。
3、CO2气瓶间有两组共4个CO2气瓶，当一组气瓶的压力下降接近0时将自动切换至另一组气瓶，此时将用完的2个气瓶卸下并更换新的CO2气瓶。更换气瓶时应先将减压阀关闭（旋松），再关上旧气瓶的总阀，将减压阀从旧的气瓶上换至新的气瓶上，打开新气瓶的总阀，再打开减压阀（旋紧），顺序不可颠倒以免冲坏减压阀。外置CODA过滤器应在气瓶更换时同时更换。
4、培养箱内的水每2周更换一次，更换原则为在培养箱内无培养基和卵子胚胎的情况下进行，培养箱内的水使用超纯水。
5、正常情况下培养箱每1~2个月进行消毒一次，特殊情况下（如发现有污染现象）即时消毒。
6、培养箱消毒应在一天工作完成后，工作台面内无卵子胚胎情况下进行，酒精消毒步骤不得在培养室内进行。
7、培养箱清洁消毒步骤为先拆卸培养箱内所有钢架，清水冲洗，干后用 75％酒精擦洗，干后再用超纯水冲洗；培养箱内壁和门用75％酒精擦拭，干后再用超纯水擦拭；
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钢架装回后将门开启至确保所有擦拭过的部位均已干；第2天再将培养箱内装水。
8、清洁消毒后的培养箱48小时后才可再进行胚胎培养。 9、所有消毒、换水操作日期均应记录在培养箱上的记录表上。
第五节 培养基及油准备
1、培养基瓶内吸取培养基尽量用单独包装的移液管而不用巴斯德吸管，尤其是当该瓶内的培养基当天用不完，还需留待以后再用时必须使用单独包装的移液管（如IVF-30、GAMAET等），或将需少量多次使用的培养液分装使用。
2、有开启的物品均要明确记录开启日期。
3、开启培养基瓶时，注意手不能碰到接触培养基的瓶塞部位，如需放下瓶塞，准备一个干净的培养皿，打开培养皿盖，将瓶塞向下放到培养皿上。
4、进行胚胎培养的培养液须提前在培养箱内平衡过夜后使用，在培养箱内的培养液超过48小时不再使用。
5、进行培养基准备时，所有未盖油的培养基均不能放在热台上以避免水分蒸发。 6、胚胎培养使用的油为即用型，使用前需在培养箱内平衡；如油装在皿中需平衡过夜，如油装在瓶内则需平衡48小时才能使用。
7、每天下午准备次日所用的需提前置入培养箱平衡的培养基，应包括次日取卵、精子处理、体外受精（含ICSI）及胚胎移植所需的培养液：
①取卵：每个患者准备4个Falcon 3001皿，其中2个皿盖上写上患者的姓名，每个皿中用移液管吸入2~2.5ml培养液（IVF-30），此液可用前一天放入培养箱而当天未用完的培养液（须在皿盖上做标记以区别），也可用当天新开启的培养液（写有名字的皿尽量用当天新开启的培养液）。每个患者准备1支装有肝素化PBS（100ml PBS加0.64ml肝素）的15ml试管，试管上标明PBS。
②精子处理及体外受精：包括Spermrinse和IVF-30，Spermrinse每个患者准备2 ml，如是PESA和TESE患者则需准备5ml；IVF-30每个患者约需4ml（此液应是当天新开启的培养液）。
③胚胎移植：根据次日ET的患者人数准备培养液，每2个ET准备1支ET冲管液（3~4ml），管上写明日期，每个ET另准备1 m1IVF-30以备第二天做ET皿时用。准备
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