现代分子生物学考试

2026/1/14 22:51:43

1.简述DNA的一二三级结构特征?

一级结构:就是指DNA四种脱氧核苷酸的连接及排列顺序,表示了该DNA分子的化学组成。

①DNA分子是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的;

②DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替连接,排在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧; ③两条链上的碱基通过氢键相结合,形成碱基对,它的组成有一定的规律—碱基互补配对原则。

二级结构:是指两条多核苷酸链反相平行盘绕所生成的双螺旋结构。右手螺旋A—DNA和B—DNA;左手螺旋Z—DNA。

三级结构:DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。超螺旋结构是DNA高级结构的主要形式,可分为正超螺旋和负超螺旋两大类。

2.DNA复制通常采取哪些方式?

复制方式:原核生物和真核生物的DNA复制主要是从固定起点从双向等速复制方式进行。 ⑴线性DNA双链的复制:线性DNA——DNA合成从5'端开始——复制叉前进——到达末端,单链被取代。

⑵环状DNA双链的复制:分为θ型、滚环型和D—环型。 ①θ型:DNA双链解旋和松开形成两个相反方向复制叉。 ②滚环型:单向复制的一种特殊方式。

双链环DNA——复制起始于某一条DNA链上——新生DNA链延伸不断取代母链——复制一圈产生单位长度线性DNA链——继续进行产生多元线性DNA链。 ③D—环型:也是单向复制的一种特殊方式。

双链环DNA——固定点解开——高度不对称复制——开始仅以一条母链作为模板链——合成出互补链——代替另一亲本链——形成D环——D环扩增——替代链经过起始点也开始复制——最后形成两个双链环DNA。

3.什么是转座子?分几类?

转座子:是存在于染色体DNA上可自主复制和转位的基本单位。可分为插入序列转座子和复合型转座子。

插入序列转座子:是最简单的转座子,是细菌的一小段可转座元件。它不含有任何宿主基因而常被称为插入序列。它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。 复合型转座子:两个插入序列包围一段中央区域,这两个序列中的一个或两个可能使整个元件DNA转座。

4.插入序列与复合型转座子异同?

相同点:①大多存在于染色体DNA中;②可自主复制和移位。 不同点:

①插入序列转座子是最简单转座子,不含任何宿主基因,复合型转座子带有某些抗 药性基因或其他宿主基因;

②插入序列末端具有倒置重复序列,复合型两端均具有倒置重复序列;

③IS序列在插入序列转座子,IS序列可以独立介导自身移动,而复合型转座子IS序列只能以复合体形式移动。

5.原核生物DNA的复制特点?

①DNA复制是从一个固定起点开始,DNA聚合酶只能延长DNA链,不能从头合成DNA链;

②复制时先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段引物再合成新DNA链; ③前导链引发过程简单,只要一段RNA引物就可在DNA聚合酶作用下合成; ④滞后链的引发由引发体来完成并发挥功能;

⑤复制起始DnaA蛋白结合在4个9bp重复序列形成起始复合物;

⑥DNA链延伸时冈崎片段长1000~2000,碱基有开链复合物前引发复合物; ⑦复制终止多个终止位点terE terD terA terF terC terB 。

1.什么是编码链?什么是模板链? 编码链(coding strand):指DNA双链中与mRNA序列(除T/U替换外)和方向相同的那条DNA链,又称有意义链。 模板链(template strand):指DNA双链中能作为转录模板,通过碱基互补原则指导mRNA前体合成的DNA链,又称反义链。

1.RNA转录的概念及其基本过程。

转录:指拷贝出一条与DNA编码链序列完全相同(除了T/U之外)的RNA单链的过程,是基因表达的核心步骤。

基本过程:模板识别、转录起始、转录延伸、转录终止。 ⑴模板识别和转录起始

①RNA聚合酶与双链DNA启动子区结合形成封闭式复合物; ②转化成开放式复合物; ③形成磷酸二酯键; ④启动子清空。 ⑵转录延伸:RNA聚合酶核心酶离开启动子,沿着DNA链移动并使新的RNA链不断伸长。 ⑶转录终止:当RNA链延伸到转录终止点时,RNA聚合酶和RNA均从DNA模板上释放出来。

2.大肠杆菌的RNA聚合酶有哪些组成成分?各个亚基的作用如何?

大肠杆菌RNA聚合酶首先由两个α亚基,一个β亚基,一个β' 亚基和一个ω亚基组成核心酶,加上一个σ亚基后则成为聚合酶全酶。

α亚基:①与核心酶的组装及启动子识别有关;②参与RNA聚合酶和部分调节因子相互作用。

β和β' 亚基:①由β和β' 亚基组成聚合酶的催化中心;

②它们在序列上与真核生物RNA聚合酶的两个大亚基有同源性; ③β亚基能与模板DNA新生RNA链及核苷酸底物相结合。 ω亚基:功能未知。

σ亚基:①负责模板链的选择和转录的起始; ②是识别模板上的启动子的关键;

③增加聚合酶对启动子的亲和力(提高103倍); ④降低对非专一位点的亲和力(降低104倍)。

3.什么是封闭复合物、开放复合物以及三元复合物?

封闭复合物:RNA聚合酶全酶+启动子DNA处于双链状态;

开放复合物:聚合全酶所结合的DNA序列中有一小段双链被解开; 三元复合物:RNA聚合酶、DNA和新生RNA。

4.简述σ因子的作用?

①负责模板链的选择和转录的起始; ②是识别模板上的启动子的关键;

③增加聚合酶对启动子的亲和力(提高103倍); ④降低对非专一位点的亲和力(降低104倍)。

5.什么是prinbnow box?它的保守序列是什么?

Prinbnow box :Prinbnow 设计了一个实验,他把RNA聚合酶全酶与模板DNA结合后,用 DNaseⅠ水解DNA,在被保护区内有5个核苷酸组成的共同序列,是RNA聚合酶的紧密结合点,称为Prinbnow box。

保守序列:大都位于起点上游10bp处,又称为-10区。?TATAA?

6.什么是上升突变?什么是下降突变?

上升突变( up mutation):启动子活动性升高的突变。如果把Prinbnow区从TATAAT变成AATAAT就会大大降低其结构基因的转录水平。 下降突变(down mutation):启动子活性降低的突变,即增加Prinbnow 区共同序列的同一性。

7.简述原核和真核细胞的mRNA的差异。

⑴真核生物5'—端有帽子结构,大部分成熟的mRNA还同时具有3'—多聚A尾巴,原核生物一般没有。

⑵原核的mRNA可编码几个多肽,真核只能编码一个。

⑶原核生物以多顺反子的形式存在,真核生物以单顺反子形式存在。 ⑷原核生物以AUG作为起始密码,有的以GUG、UUG作为起始密码;真核几乎永远以AUG作为起始密码。

⑸原核生物mRNA半衰期短,真核生物的mRNA半衰期长。

8.大肠杆菌的终止子有哪两类?请分别介绍一下它们的结构特点? ⑴不依赖于ρ因子的终止子(内在终止子)

①终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区; ②编码链上有一连串的Ts。 ⑵依赖于ρ因子的终止子 “穷追模式”:①RNA聚合酶沿模板移动;

②ρ结合到RNA链终止子上游某一点; ③ρ因子沿链向3' 端运动跟踪聚合酶; ④ρ因子赶上在终止位点暂停的聚合酶; ⑤终止三元复合物解体。

9.真核生物的原始转录产物必须经那些加工才能成为成熟的mRNA以用作蛋白质合成的模板?

由DNA转录生成的原始转录产物—核不均一RNA,即mRNA的前体经5' 加帽和3'酶切加

多聚腺苷酸,在经过RNA的剪接,编码蛋白质的外显子部分就连接成为一个怜恤的可译框架,通过核孔进入细胞质就能作为蛋白质合成的模板。

10.简述Ⅰ Ⅱ类内含子的剪接特点? ⑴Ⅰ类内含子剪接特点:剪接主要是转酶反应,即剪接反应实际上是发生了两次磷酸二酯键的转移,在Ⅰ类内含子切除体系中,第一个轻酯酶反应由一个游离的鸟苷或鸟苷酸介导,鸟苷或鸟苷酸的3'—OH作为亲核基团攻击内含子5'端的磷酸二酯键,从上游切开RNA链。在第二个转酯反应中,上游外显子的自由3'—OH作为亲核基团攻击内含子3'位核苷酸上的磷酸二酯键,使内含子被完全切开,上下游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。 ⑵Ⅱ类内含子剪接特点:主要存在于真核生物的线粒体和叶绿体rRNA基因中,在Ⅱ类内含子切除体系中,转酯反应无需游离鸟苷或鸟苷酸,而是由内含子本身的靠近3'端的腺苷酸2'—OH作为亲核基团攻击内含子5'端的磷酸二酯键,从上游切开RNA链后形成套索状结构,再由上游外显子的自由3'—OH作为亲核基团攻击内含子3'位核苷酸上的磷酸二酯键,使内含子被完全切开上下游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。


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