第九讲 目的基因的克隆
吴 乃 虎
中国科学院遗传与发育生物学研究所
2005年8月
目 录
一、基因克隆的一般概念 1． 基因克隆定义 2． “克隆”的不同含义 3． 基因克隆的过程 4． DNA片段的产生与分离 5． 基因文库
二、基因克隆与分离的实验策略 1． 物理策略 2． 生物策略 3． 克隆样品的选择 4． 基因文库库容测算 三、cDNA基因克隆 1． 概述
2． cDNA文库的构建
3． 低丰度mRNA之cDNA克隆 4． 稀少mRNA的cDNA克隆 5． 全长cDNA的合成 6． cDNA克隆的优越性 四、基因组DNA克隆
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1． cDNA克隆的局限性 2． 基因组DNA克隆的优越性 3． 构建基因组文库的载体类型 五、基因定位定隆 1． 基因定位克隆概述 2． RFLP分子标记 3． RFLP作图原理与步骤 4． 染色体步移
5． 大尺度物理图谱的构建
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目的基因的克隆
一、基因克隆的概念 1．基因克隆的定义
基因克隆亦叫做DNA克隆(DNA cloning)，它是指将外源基因或DNA片段插入到克隆载体的分子上，构成重组的DNA群体，并转化到寄主细胞进行复制和繁殖，以便从大分子DNA或DNA片段混合物中分离纯化目的基因或特定DNA片段的实验操作，叫做基因克隆。严格地说，基因克隆应叫做DNA克隆，因为被克隆的是基因组的全部(理论上)的DNA片段，而并不是所有的DNA片段都编码有基因。
*要注意基因克隆与基因分离两者在概念上的差别！完成了基因克隆并不等于完成了基因的分离！尽管两者之间存在密切的相互关系。因此在日常交谈中或是一般文字叙述中，甚至于某些正式有关文件中，常把“基因克隆”与“基因分离”等同使用，不作区分，是不妥当的。
*有时我们所说的基因克隆，即所谓的“分子克隆”(Molecular cloning)，实质上包含着目的基因的分离与鉴定两个主要的内容，基因克隆的全过程包括如下四个步骤：
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