5．结果判断
一般在染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。从正极端起依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
6．透明
将染色后漂洗干净的薄膜用滤纸吸干，再浸入透明液的甲液中，浸泡2分钟后立即浸入透明液的乙液中，浸泡1分钟（要准确），然后迅速取出薄膜，将它紧贴在玻璃板上，不要存留气泡。大约2—3分钟内薄膜完全透明，放置10—15分钟后，用吹风机将膜吹干。在水龙头下将玻璃板上透明的薄膜润湿后，用单面刀片从膜的一角撬起，并划开一端，再用手捏住撬起的膜轻轻撕下，可以容易地从玻璃板上取下透明的薄膜。用书压平薄膜暂时保存好，则成为色泽鲜艳又透明的血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱，可长期保存不褪色。
7．定量（了解原理）
未经透明处理的血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱可直接用于定量测定。一般采用洗脱法或光密度计法，测定各蛋白质的相对百分含量。
（1）洗脱法：将电泳图谱的各区带剪下，分别浸于盛有0.4N氢氧化钠溶液的试管中，清蛋白管加入4毫升，其余各管各加2毫升，摇匀，放入37℃恒温水浴中浸提30分钟，每隔10分钟充分摇动一次，以便将色泽完全洗脱下来。该溶液颜色比较稳定，在室温24小时内颜色强度无显著变化。然后在620毫微米波长处比色，测定各管的光密度值为O.D.A \\ O.D. α1 \\ O.D. α2 \\ O.D. β\\ O.D. γ。按下列方法计算各部分蛋白质所占百分率。
先计算光密度值总和（简写为T）：
T=2×O.D.A+O.D. α1 +O.D. α2 +O.D. β + O.D. γ 再计算血清各部分蛋白质所占百分率（即相对百分含量）： 清蛋白﹪ =（2×O.D.A／T）×100 β球蛋白﹪= （O.D. β／T）×100 α1球蛋白﹪=（O.D. α1／T）×100 γ 球蛋白﹪= （O.D. γ／T）×100 α2球蛋白﹪=（O.D. α2／T）×100 正常值：
清蛋白 54.0—73.0﹪ α1球蛋白 2.8—5.1﹪ α2球蛋白 6.3—10.6﹪ β 球蛋白 5.2—11.0﹪ γ 球蛋白 12.5—20.0﹪
五、 思考题
1．比较醋酸纤维素薄膜电泳与纸电泳有什么异同点？ 2．指出醋酸纤维素薄膜用作电泳的支持物有何优点？
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实验三：酶的特异性（专一性）
一、实验目的
1. 了解酶的特异性
2. 掌握检查酶的特异性的方法及其原理
二、实验原理
酶是一种生物催化剂，它与一般催化剂最主要的区别是酶具有高度的特异性即专一性。所谓特异性指的是一种酶只能对一种化合物或一类化合物（通常在这些化合物的结构中具有相同的化学键）起一定的催化作用，而不能对别的物质发生催化反应。例如：淀粉酶能催化淀粉水解，但不能催化脂肪水解。而脂肪酶则能催化脂肪水解，却不能催化淀粉水解。
本实验以唾液酶（含淀粉酶及少量麦芽糖酶）和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，说明酶的特异性。
三、实验试剂
1、2% 蔗糖溶液
2、0.3%氯化钠的1%淀粉溶液(新鲜配制) 3、200倍新鲜唾液 4、蔗糖酶溶液 5、本尼迪克特试剂
四、实验器材
1、试管 2、吸量管 3、烧杯
4、竹试管夹 5、电热炉 6、恒温热水器
五、实验操作
1、淀粉酶的特异性实验
取2支试管，各加入本尼迪克特（Benedict）试剂2毫升，再分别加入1%淀粉溶液或2%蔗糖溶液各4滴。混合均匀后，放在沸水浴中煮2—3分钟。观察有无红黄色沉淀产生，纯净的淀粉和蔗糖不呈阳性反应。
再取2支试管，每管各加入稀释200倍的新鲜唾液1毫升。再分别加入1%淀粉溶液和2%蔗糖溶液各3毫升。混匀，放入37℃恒温水浴中保温，15分钟后取出。各加本尼迪克特试剂2毫升，摇匀，放在沸水浴中煮2—3分钟。观察有无红黄色沉淀产生。
应该指出，关于新鲜唾液的稀释倍数，一般为200倍。但是，由于不同人或同一人不同时间。
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采收的唾液内淀粉酶的活性并不相同，有时差别很大，稀释倍数可以是50—300倍，甚至超出此范围。因此，应事先确定稀释倍数。另外，要注意除去唾液里的气泡，避免稀释倍数不准确而影响实验结果。稀释好的新鲜唾液用滤纸过滤后待用。
2、蔗糖酶特异性实验
取2支试管，各加入蔗糖酶溶液1毫升，再分别加入1%淀粉溶液3毫升和2%蔗糖溶液3毫升。摇匀，放入37℃恒温水浴中保温，10分钟后取出，各加入本尼迪克特试剂2毫升，混匀后放入沸水浴煮2—3分钟。观察有无红黄色沉淀产生。
再取一支试管，加入蔗糖酶1毫升和蒸馏水3毫升，混匀，加入本尼迪克特试剂2毫升，摇匀，再沸水浴中煮2—3分钟。可以观察到试管内溶液呈现轻度阳性反应，这是由于蔗糖酶溶液本身含有少量还原性杂质的缘故。因此，用此管作为对照，即可解释上述用淀粉作底物的试管内呈现轻度阳性反应的原因。
六、思考题
1. 什么是酶的特异性?本实验结果为什么能说明酶具有这种性质？ 2. 为什么用于本实验的蔗糖必须是分析纯的试剂?
3. 用煮沸后的蔗糖酶水解淀粉或蔗糖，会产生什么现象？为什么？这种试验与
操作二的作法有何区别？试说明酶学实验中安排对照试验的必要性。
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实验四：激活剂、抑制剂、pH、温度对酶活性的影响
第一部分 激活剂和抑制剂对酶活性的影响
一、实验目的
1. 了解酶促反应的激活与抑制。
2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶反应的方法和原理。
二、实验原理
酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂；有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。例如，氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为其抑制剂。
很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。例如，氯化钠达到1/3饱和时就可抑制唾液淀粉酶活性。
三、实验试剂
1、0.1%淀粉溶液
2、稀释100-200倍的新鲜唾液 3、1%氯化钠的溶液 4、1%硫酸铜溶液 5、碘化钾-碘溶液
四、实验器材
1、试管 2、烧杯 3、吸量管 4、恒温水浴器 5、滴管
五、实验操作
取3支试管，编号。向第一支试管中加入1%氯化钠溶液1毫升，向第2支试管加入0.1%硫酸铜溶液1毫升，向第3支试管中加入蒸馏水1毫升作对照了。再向每支试管加入0.1%淀粉溶液3毫升和稀释的唾液1毫升。摇匀各管内容物，一齐放入37℃恒温水浴中保温,10-15分钟后取出.冷后,各滴入2-3滴碘化钾-碘溶液,混匀。观察比较3管颜色的深浅，并解释之。
如果激活剂或抑制剂的作用不明显，主要原因可能是唾液淀粉酶活性不够高，可以适当延长反应时间或者降低唾液稀释倍数，然后再继续实验。
六、思考题
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