C．在生物体外对DNA分子进行改造
D．创造符合人们需要的新生物类型和生物产品 答案 D
解析 A、B和C三项均为基因工程操作的具体内容，但不是基因工程的目的。实施基因工程的最终目的是通过基因操作定向改造生物的遗传物质，创造符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
2．下列关于限制酶的叙述中，错误的是( ) A．它能在特殊位点切割DNA分子
B．同一种限制酶切割不同的DNA产生的黏性末端能够很好地进行碱基配对 C．它能任意切割DNA，从而产生大量DNA片段 D．每一种限制酶只能识别特定的核苷酸序列 答案 C
解析 限制酶是基因工程的重要工具之一。每种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割DNA分子。同一种限制酶切割不同的DNA产生的黏性末端能进行互补配对。 3．下列有关限制酶的说法，正确的是( ) A．限制酶主要是从真核生物中分离出来的 B．限制酶的识别序列只能由6个核苷酸组成
C．限制酶能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开
D．限制酶切割产生的DNA片段末端都为黏性末端 答案 C
解析 限制酶主要存在于微生物中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的位点上切割DNA分子，切开后形成两种末端——黏性末端和平末端。少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。
4．下列关于DNA连接酶的叙述，不正确的是( ) A．催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接 B．催化相同平末端的DNA片段之间的连接 C．催化两个黏性末端互补碱基氢键的形成
D．催化DNA分子两条链的脱氧核糖与磷酸之间磷酸二酯键的形成 答案 C
解析 氢键是分子间作用力，其断裂和形成与DNA连接酶无关。
5．如图，两个核酸片段在适宜条件下，经X酶的催化作用，发生下述变化，则此酶是( )
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A．DNA连接酶 B．RNA聚合酶 C．DNA聚合酶 D．限制酶 答案 A
解析 DNA连接酶可以将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来。 知识点二 载体
6．作为基因工程中的“分子运输车”——载体，应具备的条件是( )
①必须有一个至多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上 ②载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制 ③必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选
④必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去 ⑤大小应合适，太大则不易操作 A．①②③④ B．①②③⑤ C．①②④⑤ D．①②③④⑤ 答案 D
解析 基因操作中要使载体携带目的基因，其上必须有一个至多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上；载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制；必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选；必须是安全的；大小应合适，太大则不易操作。
7．下列哪项不是基因工程中经常使用的载体( ) A．细菌质粒 B．λ噬菌体的衍生物 C．动植物病毒 D．细菌拟核区的DNA 答案 D
解析 细菌拟核内的DNA分子不具备载体的基本条件，不能用于基因工程。 8．下列有关细菌质粒的叙述，正确的是( ) A．质粒是存在于细菌细胞中的一种颗粒状的细胞器 B．质粒是细菌细胞中能自主复制的小型环状DNA分子 C．质粒只有在侵入宿主细胞后在宿主细胞内复制 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 答案 B
解析 质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子，可以在细菌细胞内或宿主细胞内复制。
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能力提升
9．下列对基因工程的理解，正确的是( )
①它是一种按照人们的意愿，定向改造生物遗传特性的工程 ②对基因进行人为改造 ③是体外进行的人为的基因重组 ④在实验室内，利用相关的酶和原料合成DNA ⑤主要技术为体外DNA重组技术和转基因技术
⑥在DNA分子水平进行操作 ⑦一旦成功，便可遗传 A．①②③④⑤⑥ B．①③④⑤⑥⑦ C．①②③⑤⑥⑦ D．①③⑤⑥⑦ 答案 D
解析 基因工程可以对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物，而不是对基因进行人为改造。 10．基因工程在操作过程中需要限制酶、DNA连接酶、载体三种工具。以下有关基本工具的叙述，正确的是( )
A．所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成 B．所有DNA连接酶均能连接黏性末端和平末端 C．真正被用作载体的质粒都是天然质粒
D．原核生物内的限制酶可切割入侵的DNA分子而保护自身 答案 D
解析 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成；DNA连接酶包括E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，前者只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来；在基因工程操作中真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
11．现有一长度为1 000碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoRⅠ 单独酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp，用Kpn Ⅰ 单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是( )
答案 D
解析 由题干条件可知用EcoRⅠ酶切后，并不能将DNA分为两段，故可判断为环状DNA，再根据“用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子”可得到答案D。
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12．下列黏性末端是由同一种限制酶切割而成的是( ) ①TCGGACTTAA ②ACTGTCCA ③AATTCG ④AGCTTCAG
A．①② B．①③ C．①④ D．②③ 答案 B
解析 只有①和③两个黏性末端的碱基是互补的，可以说明一般情况下是由同一种限制酶切开。
13．基因工程中，需要使用限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—。
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(1)根据已知条件和图回答下列问题：
①上述质粒用限制酶________切割，目的基因用限制酶__________切割。 ②将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，还要加入适量的__________。 ③请指出质粒上至少要有一个标记基因的理由：______________________________ ________________________________________________________________________。 (2)不同生物的基因可以拼接的结构基础是____________________________________ ________________________________________________________________________。 答案 (1)①Ⅰ Ⅱ ②DNA连接酶 ③检测重组质粒(或目的基因)是否导入受体细胞 (2)DNA结构基本相同(其他合理答案均可)
GGATCC
解析 要形成重组质粒，质粒只能出现一个切口，并且至少保留一个标记基因，因CCTAGG=====序列在GeneⅡ上，因此用限制酶Ⅰ切割质粒，保留GeneⅠ标记基因；目的基因必须切割两次，
GGATCC
切割后产生的黏性末端能与质粒的黏性末端互补，CCTAGG=====序列中有酶Ⅱ的切割序列，因此用酶Ⅱ，产生的末端互补。
14．下图表示两种限制性核酸内切酶识别DNA分子特定序列，并在特定位点对DNA进行切割的示意图，请回答以下问题： 甲：
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