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种到25毫升方形的培养瓶内，加入5毫升预热37℃的羊水培养液，轻轻打匀，置37℃培养箱（最好采用CO2培养箱）。静止培养6-7天。接种量，通常10毫升羊水的细胞接种一瓶。
3、6-7天后，镜下观察细胞生长情况，若羊水细胞已贴壁，并形成许多细胞小岛，即进行换液。
4、换液时，轻轻吸去旧的培养液，加入新鲜的培养液5毫升 5、细胞换液后生长加快，隔日观察，当细胞生长旺盛，出现许多透亮圆形饱满的细胞时（一般约为14-30天），可收集细胞进行染色体制片。
6、若换液后，细胞生长缓慢，仍旧只有几个孤立细胞小岛，或者细胞形态只有成片的树皮状的细胞，无圆形的细胞出现。就要进行原瓶传代或换瓶传代：倒去培养液，加入1-2毫升EDTA胰酶，于37℃作用1-2分钟，轻轻吸去胰酶液，加入5毫升培养液，轻轻将细胞打匀，或换上新瓶或用原来的瓶，37℃静止培养，3天后观察细胞，细胞生长旺盛，出现较多双圆形细胞时可进行染色体制片。
7、收集细胞前5-6小时，加入秋水仙素，终浓度为0.1微克/毫升，或或收集细胞前16-18小时，加入秋水仙素，终浓度0.02-0.05微克/毫升，37℃继续培养。
8、倒去培养液，加入EDTA胰酶1-2毫升。镜下观察胰酶作用情况，当细胞收缩变圆时候，立即轻轻倒去胰酶，加入5毫升生理盐水，轻轻将瓶壁的细胞吹打脱落，平衡离心速度1000-1200转/分。时间8-10分钟。弃盐水上清。然后进行低渗处理，低渗、固定、制片等步骤与外周血染色体标本制备基本相同，所不同的是，低渗液、固定液的每次使用量每管3-5毫升，以减少细胞损失。由于羊水细胞易破，故操作的力度一定要轻，只能用气吹打，不能吸打。
* 注意事项：
①抽取妊娠16-20周的羊水最好，月份过小羊水不足，月份过大羊水细胞老化不易培养成功。
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②抽羊水前翻动孕妇的身体，以取得较多的羊水细胞。 ③培养液的胎牛血清的质量十分关键。
④培养开始4天内不要翻动，以免影响细胞贴壁
⑤收集细胞的时机要掌握好，生长不够旺盛的，形态成树皮状的细胞收不到分裂相，只有生长旺盛且呈现较多圆形透亮的细胞时，才能收到较多的中期细胞。
四、染色体显带技术
染色体显带技术常用的有荧光Q-带、Giemsa G-带、异染色质的C-带等。这里介绍较为常用的Giensa G -带C-带技术。 1、G-显带染色体标本的制备
方法一：
（1）将配制好的0.25%的胰蛋白酶溶液60毫升倒入立式染色缸内，37℃水溶预热，用3% Tris调PH=7
（2）将标本片浸入胰酶溶液中，不断轻轻摆动，新鲜标本只需处理3-9秒钟，老标本则需处理3-5分钟。
（3）立即投入1：10或1：20的Giemsa工作液，染色15-20分钟
（4）自来水冲净，气干。 方法二：
（1）45毫升生理盐水或双蒸水倒入立式染色缸内，加入已配好的2%胰酶液5毫升，用3% Tris溶液调PH=7于37℃预热。
（2）把染色体标本片浸入37℃上述胰酶工作液中，略加摇动，处理30秒左右。
（3）取出后立即用1：10Giemsa工作液染色8-10分钟，自来水冲净。
* 注意事项：
①胰酶的品质会直接影响显带的质量，购买品牌试剂较保险。
②胰酶的活性与PH值和温度有关，在PH=7温度37℃状态
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下，胰酶活性最高。
③胰酶处理时间长短与标本片片龄有关，新鲜的标本处理时间短，且带纹较清晰，建议标本片的片龄在2-7天内较适宜。
④Giemsa工作液要现用现配
⑤胰酶工作液长时间置37℃水浴，容易浑浊污染，应弃之。 2、C-带染色体标本的制备
C显带特点：对染色体中的结构性异染色质容易染色，对常染色质只能显示较淡的轮廓。C显带所显示着色较深的结构部位：①各染色体的着丝粒；②各近端着丝粒的部位；③在1、9、16号染色体具有次缢痕的位置上；④Y染色体的长臂远端，此部分系Y染色质部分。其它部分着色很淡。
核型分析过程，对某些染色体变异问题，往往需要C显带技术与G显带技术结合分析，更能准确判断染色体的畸变。
方法一：
（1）将常规制备染色体标本片放入0.2NHCL溶液中，室温下，处理15-30分钟。
（2）自来水冲净后，再将标本片浸入预温到65℃的5% Ba(OH)2溶液中，处理10分钟。
（3）自来水冲净后，再把标本片投入预温到65℃的2×SSC溶液中，处理1-1.5小时；
（4）自来水冲净后，用1：10 Giemsa工作液染色0.5-1小时。
（5）自来水冲净，气干。 方法二：
（1）将制好的标本片放入0.2N HCL中，室温下1小时。 （2）水洗净（均用自来水冲洗）
（3）浸入1% Ba(OH)2水溶液中，温度预热到50℃，处理时间15-20秒。
（4）水洗净
（5）浸入预温到60℃的2×SSC溶液中，处理90分钟。 （6）用水彻底冲净；
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（7）1：10 Giemsa染色液染色10-15分钟 （8）水冲净、气干。 * 注意事项：
①标本片年龄不能超过一个月
②各种处理溶液一定要达到所需的温度时，才放入表本片进行处理
③每一步处理后，要立即用自来水彻底冲净后，才进行下一步处理。 3、R带技术
（1）试剂
①pH6.8PBS：溶液A——1/15mol/LKH2PO4、溶液B——1/15mol/LNa2HPO4。pH6.8PBS为1000毫升A液加900毫升B液。
②Earles液：溶液A—NaCl6.80克、KCl0.40克、NaH2PO4·H2O0.14克、蒸馏水800毫升。
溶液B—无水CaCl20.20克、MgCl·6H2O0.17克、蒸馏水200毫升。
将溶液A倒入溶液B中，混合后即可。
③Hoechst-33258原液：Hoechest-332582毫克，蒸馏水4毫升。
Hoechest工作液：200毫升1/15mol/LPBS加0.75毫升原液。 ④吖啶橙（acridineorange） 配制pH6.5PBS： 溶液A——0.07mol/LNa2HPO4·12H2O、溶液B——0.07mol/LKH2PO4。将32毫升A液和68毫升B液混合。
吖啶橙工作液：0.1克吖啶橙于100毫升0.07mol/LPBS中。 ⑤胸腺嘧啶核苷（Thymidine）：使最终浓度为每毫升为0.3毫克。
⑥5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）：使最终浓度为3×10-5mol/L。 2.显带步骤
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