5血管新生的“平衡失调假说及证据”。
佛克曼首先建立的是兔眼角膜模型，另一个模型是鸡胚绒毛尿囊膜试验（CAM）。人体在健康时，血管新生刺激因子和抑制因子同时存在，二者是矛盾的两个方面，互相拮抗，使机体处于平衡状态。对血管新生刺激因子来说，当身体受伤时，会立刻征召新生血管有利于修复组织缺损，另一方面，又会替肿瘤细胞招募新生血管，促进肿瘤的生长和转移，损害机体，此时血管新生刺激因子是矛盾的主体。同理，血管新生抑制因子对机体也是又有利又有害。
6简述大肠杆菌表达体系的优缺点。
用途是基因工程主要原核受体菌。外源DNA克隆和扩增；原核基因高效表达；基因文库构建。
优点：遗传背景清楚、载体受体系统完备、生长迅速、培养简单、重组子稳定[1] 缺点：产结构复杂、种类繁多的内毒素 7如何检测端粒酶活性?
一，TRAP-PCR银染法：原理端粒DNA与细胞的寿命密切相关，而合成又依赖于端粒酶。正常人体细胞中不能检测出端粒酶活性的表达而肿瘤细胞株及大多数肿瘤组织中的端粒酶活性却异常的高表达。TRAP银染法端粒酶活性检测试剂盒是采用端粒重复序列扩增的方法，利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6 bp的梯状条带，条带的深浅表示端粒酶活性的大小。
二、荧光定量PCR法：原理端粒酶蛋白催化亚基TERT或TRT具有反转录酶的主要特征，其表达在正常细胞中受到抑制，与端粒酶活性的表达一致。实时荧光定量PCR端粒酶检测实验通过检测TERT的mRNA表达水平来间接反应端粒酶的活性。 8简述mtDNA结构异常的可能原因。
mtDNA表现为母系遗传。由于其裸露于线粒体基质中，既没有组蛋白的结合保护，又缺少DNA损伤的修复系统，所以极易发生突变，且突变结果容易保存下来，因此mtDNA的突变率为核DNA的10倍以上。[1]有些遗传病，如Leber遗传性视神经病，肌阵挛性癫痫等均与线粒体基因突变有关。
9何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。 可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。
限制作用实际就是限制酶降解外源DNA ，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的 10何谓血管抑制因子？试举例说明。
血管生成过程受到血管增生刺激因子和血管增生抑制因子的调节。常见的抑制因子有血管抑素 (angi0statin)、内皮抑素 (endostatin)、色素上皮衍生因子(PEDF)、kallistatin，肿瘤抑素 (tumstatin)等 。
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11简述Ⅱ类限制性核酸内切酶的作用特点？ Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。
Ⅱ类酶有EcoR I、BamH I、Hind Ⅱ、Hind Ⅲ等。其分子量小于105道尔顿；反应只需Mg2+；最重要的是在所识别的特定碱基顺序上有特异性的切点，因而DNA分子经过Ⅱ类酶作用后，可产生特异性的酶解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴别。 只具有认知切割的作用，修饰作用由其他酵素进行。所认知的位置多为短的回文序列（palindrome sequence）；所剪切的碱基序列通常即为所认知的序列。是遗传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、HindⅢ。 12阐述肿瘤“饥饿疗法”的依据和策略。
肿瘤”与“血管”的关系是“树”与“根”、“鱼”与“水”的关系，“血管”就是肿瘤的“命门”，破坏或者清除肿瘤的血管，肿瘤必然死亡。
血液肿瘤血管生成的实验研究提示，抑制血管生成势必导致血液系统恶性细胞血供不足，营养缺乏，处于“饥饿”状态，从而促进细胞凋亡。这为提出抗血管生成治疗的新策略提供了理论和实验依据。定向于血管生成的治疗代表了一种特异的、毒性小而有效的治疗方法。随着对血管生成在血液系统恶性疾病中的深入研究，抗血管生成在临床治疗中的应用必将取得更大的进展。
13以质粒为例，说说基因载体应具备哪些条件？
是染色质外的双链共价闭合环形DNA能自主复制，是能独立复制的复制子质粒对宿主生存并不是必需的。
14简述血浆脂蛋白的分类及其功能。
（1） 乳糜微粒(<0.95g/cm3)，密度非常低，运输甘油三酯和胆固醇酯，从小肠到组织肌肉和adipose组织。
（2） 极低密度脂蛋白VLDL(0.95-1.006g/cm3)，在肝脏中生成，将脂类运输到组织中，当VLDL被运输到全身组织时，被分解为三酰甘油、脱辅基蛋白和磷脂，最后，VLDL被转变为低密度脂蛋白。
（3） 低密度脂蛋白(LDL，1.006-1.063g/cm3)，把胆固醇运输到组织，经过一系列复杂的过程，LDL与LDL受体结合并被细胞吞食。
（4） 高密度脂蛋白(HDL，1.063-1.210g/cm3)，也是在肝脏中生成，可能负责清除细胞膜上过量的胆固醇。当血浆中的卵磷脂：胆固醇酰基转移酶 LCAT将卵磷脂上的脂肪酸残基转移到胆固醇上生成胆固醇脂时，HDL将这些胆固醇脂运输到肝。肝脏将过量的胆固醇转化为胆汁酸。
16质粒作为基因工程载体应具备什么条件？
能自主复制，是能独立复制的复制子对宿主生存并不是必需的。 （1）复制子（ori）：一段具有特殊结构的DNA序列；
（2）有一个或多个便于检测的遗传表型，如抗药性、显色表型反应等； （3）有一个或几个限制性内切酶位点，便于外源基因片段的插入； （4）适当的拷贝数。
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17为什么选用M13噬菌体作定点突变的目的基因载体？
M13DNA的复制起始位点定位在基因间隔区内。但是基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失或插入外源DNA片段，也不会影响M13DNA的复制，这为13DNA构建克隆载体提供了条件。
18、VEGF促进血管增生的机制？ VEGF在血管新生中起重要作用
[10]
：①VEGF通过增强小血管内皮细胞内的囊泡、细胞器、囊
状结构的活性来促进血管腔内和腔外血浆成分代谢，以及通过对钙粘蛋白/链蛋白复合体的作用使单层内皮细胞之间的粘附连接松解，从而提高循环代谢中小血管通透性。血管通透性增加可使血浆蛋白外渗并形成细胞外基质，引起内皮细胞和基质细胞的转移。②VEGF刺激内皮细胞产生纤溶酶原激活物(uPA和tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）和胶原酶，并使蛋白分解增加而引起血管外基质成分改变，为内皮细胞迁移创造条件。③VEGF刺激内皮细胞增殖（VEGF仅可刺激内皮细胞增殖，而不能刺激其他类型细胞，如角膜内皮细胞、晶状体上皮细胞、纤维母细胞及肾上腺皮质细胞的增殖）。④VEGF促进内皮细胞的迁移，这是从血管前体形成内皮分支重要的一步。⑤VEGF抑制内皮细胞的凋亡。 19何谓胆固醇逆转运作用？简述其作用机制及生物学意义。
HDL 将多余的胆固醇从周围组织细胞(包括动脉粥样斑块)转运到肝脏进行机体的再循环或以胆酸的形式排泄出体外，这一过程称作胆固醇的逆向转运(RCT)。胆固醇通过RCT这一过程可以减少其在血管壁的沉积，从而阻止动脉粥样硬化的发生。胆固醇的逆转运包括组织细胞胆固醇的流出、胆固醇的酯化以及清除。 20从基因文库钓取目的基因的困难何在？ 存在两个限制因素：
1） 必须存在着目的基因的突变品系 2） 需要一种只有野生型能够生长的培养基。 21何谓“内共生假说”，列举出支持它的证据。
认为线粒体来源于细菌，即细菌被真核生物吞噬后,在长期的共生过程中,通过演变,形成了线粒体。该学说认为:线粒体祖先原线粒体(一种可进行三羧酸循环和电子传递的革兰氏阴性菌)被原始真核生物吞噬后与宿主间形成共生关系。在共生关系中,对共生体和宿主都有好处：原线粒体可从宿主处获得更多的营养,而宿主可借用原线粒体具有的氧化分解功能获得更多的能量。由美国生物学家马古利斯（LynnMargulis）于1970年出版的《真核细胞的起源》一书中正式提出。她认为，好气细菌被变形虫状的原核生物吞噬后、经过长期共生能成为线粒体，蓝藻被吞噬后经过共生能变成叶绿体，螺旋体被吞噬后经过共生能变成原始鞭毛。
22谈谈基因工程及其应用价值。
基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。
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应用价值：农牧业、食品工业：运用基因工程技术，不但可以培养优质、高产、抗性好的农作物及畜、禽新品种，还可以培养出具有特殊用途的动、植物。环境保护：基因工程做成的DNA探针能够十分灵敏地检测环境中的病毒、细菌等污染。基因工程做成的“超级细菌”能吞食和分解多种污染环境的物质。医学：用基因治病是把功能基因导入病人体内使之表达，并因表达产物——蛋白质发挥了功能使疾病得以治疗。医药卫生：基因工程药品的生产，基因诊断与基因治疗。
23为什么说端粒酶是一个抗癌靶点? 有何抗癌策略?
端粒酶在绝大多数恶性肿瘤中特异性表达，这使得人们对肿瘤的抗端粒酶疗法产生了特别的关注。设想以端粒、端粒酶为靶点，通过抑制癌细胞端粒酶活性或直接抑制端粒延长、稳定，而使细胞无法连续增殖，继而进入衰老途径，直至死亡。同时端粒、端粒酶在肿瘤细胞与正常体组织之间的差别又可以减少端粒、端粒酶抑制剂对机体的毒副作用。 抗癌策略:1 控制端粒延长靶点的物质；2 抑制端粒酶结构和功能靶点的物质。
24根据端粒和端粒酶的结构和功能特点论述它们与细胞“永生化”的关系？
端粒（Telomere）是真核细胞染色体末端的特殊结构。人端粒是由6个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成。端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。 端粒酶（Telomerase）是使端粒延伸的反转录DNA合成酶。是个由RNA和蛋白质组成的核糖核酸-蛋白复合物。其RNA组分为模板，蛋白组分具有催化活性，以端粒3'末端为引物，合成端粒重复序列。端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。 端粒的缩短，引起衰老。如果端粒长度得不到维持，细胞停止分裂或者死亡。在某种情况下，濒临衰亡的细胞愈变成永生细胞，即癌细胞。 25从基因组遗传信息传递的角度论述线粒体与原核生物的相似之处。
26为什么说端粒是历数细胞生命历程的“分子钟”?
端粒本身没有任何密码功能，它就像一顶高帽子置于染色体头上。在新细胞中，细胞每分裂一次，染色体顶端的端粒就缩短一次，当端粒不能再缩短时，细胞就无法继续分裂了。这时候细胞也就到了普遍认为的分裂100次的极限并开始死亡。因此，端粒被科学家们视为“生命时钟”。
27从脂蛋白代谢的角度阐述脂肪肝可能的发生机制和治疗策略。
脂类代谢障碍是产生脂肪肝的原因： (1)食物中脂肪过量、高脂血症及脂肪组织动员增加(饥饿、创伤及糖尿病)，游离脂肪酸(FFA)输送入肝增多，为肝内三酰甘油合成提供大量前体。 (2)食物中缺乏必需脂肪酸，急性酒精中毒、急性苏氨酸缺乏、摄入大剂量巴比妥盐等使肝细胞内三酰甘油及游离脂酸合成增加。 8
