蒸馏水,1小时后,用滤纸把水吸干,再加浓缩胶。 浓缩胶(10ml)：
30%聚丙烯酰胺溶液 1.67 ml 0.1mol/L Tris-HCI(PH6.8) 1.25 ml ddH2O 7.03ml 10%过硫酸铵 0.1ml TEMED 12ul
将上面几种溶液混合,立即加到玻璃板里,然后在胶上面轻轻插上梳子。 3.3.4 加样
加完浓缩胶1小时之后,轻轻取出梳子,用滤纸把每个孔里的水都吸干,分别加人9种不同的组织各50ul。 3.3.5 电泳
加样完毕后,在40C条件下进行电泳,具体是这样,在电泳槽里加入Tris-Gly溶液(PH8.3)(5*)电极缓冲液,电泳时间：100V浓缩1小时,200V分离3-4小时.电泳完毕后,取出胶板,在注射器里装满水,顺着胶板壁将胶冲到培养皿中去,然后用蒸馏水算洗1到2次。 3.3.6 染色
将配制好的染色液(具体配方见下)培养皿中,染色30分钟到1小时。 3.3.7 保存
到掉染液,用蒸馏水算洗1到2次,保存于7%的醋酸中。用于拍照
及结果分析 4.各种染色液的配方
4.1 乳酸脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，1M乳酸钠
(PH7.0)10ml,0.1M
氯
化
钠
5mg,0.5MTris-HCI(PH7.1)15ml,100ml容量瓶定容。
4.2 苹果酸脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，1M苹果酸钠(PH7.0)10ml,0.5MTris-HCI(PH7.1)20ml,100ml容量瓶定容。
4.3 谷氨酸脱氢酶: NAD+60mg、PMS2mg、NBT30mg，1M谷氨酸钠(PH7.0)5ml,0.5磷酸缓冲液(PH7.0)25ml,100ml容量瓶定容。 4.4乙醇脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，95%乙醇4ml,0.2MTris-HCI(PH8.0)14ml,100ml
容
量
瓶
定
容.0.2MTris-HCI(PH8.0)缓冲液的配方:0.605gTris.加200mlddH2O.用浓盐酸调PH8.0,250ml容量瓶定容。
4.5 酯酶：1%A.B-醋酸萘酯溶液3ml、坚牢蓝RR盐100mg,0.5M Tris-HCI(PH7.1)缓冲液10ml,100ml.。容量瓶定容1%A.B-醋酸萘酯溶液的配方：1gA-醋酸萘酯和1gB-醋酸萘酯，溶于50ml丙酮和50ml蒸馏水中。
4.6 过氧化物酶：0.1g联苯胺,5ml无水乙醇,1.5M乙酸钠10ml,1.5M乙酸10ml。
4.7 苹果酸酶：90ml Tris-HCI(PH8.0)缓冲液，10ml 2M DL-苹果酸(PH8.0)，NADP+50mg、NBT30mg、PMS2mg。
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