杂质校正因子、内标法

2026/4/24 19:35:27

1、绝对校正因子(f):HPLC定量测定中,物质的检测量m与色谱响应值(峰面积等)A之间的比值(m / A)称为绝对校正因子,即单位响应值(峰面积等)所对应的被测物质的量(浓度或质量)。 响应因子是绝对校正因子的倒数。

2、相对校正因子(fis):某物质i 与所选定的参照物质s的绝对校正因子之比,即为相对校正因子,即通常所讲的校正因子(fi / fs)。

绝对定量校正因子一般用于外标法,相对定量校正因子一般用于内标法。用面积归一化法做含量测定时,不可简单地认为各成分的峰面积百分比就是它们的含量百分比哦,理由如上所述,各成分含量与响应的比例关系可不一定都相同啊!

注释:

Cs —— a物质标准品浓度(或含量) Ci——标准品中内标物浓度(含量) As——a物质标准品的峰面积(浓度为Cs) Ai——标准品中内标物峰面积

Cx——a物质在样品中的浓度(或含量),需要计算的数据 Ci\——样品中内标物的浓度或含量

Ax——样品中a物质的色谱峰面积。 Ai\——样品中内标物的峰面积。

3、杂质校正因子

(1)、f = 主成分斜率 / 杂质斜率 = f杂 / f主(区别于药典的校正因子:f = 内标物斜率 / 主成分斜率,主成分是被检测、被定量的物质),此公式,杂质是被检测、被定量的物质,而主成分为内标物,响应因子是绝对校正因子的倒数(即:主成分斜率 = 1 / f主)。 (2)、杂质% = f × A杂 / A主。

假设响应因子为k,则有k = A / m(单位质量的物质相当于多少峰面积),杂质k杂 = A

/ m杂,主成分k样 = A样 / m样,则主成分中杂质含量w = m杂 / m样 * 100%,即:w =

(A杂 / k杂)/(A样 / k样)*100% =(k样 / k杂)*(A杂 / A样)*100%;根据药典,加校正因子自身对照法计算杂质含量的公式:w = f × A杂 / A样,

校正因子:f = k样 / k杂 =(A样 / C样)/(A杂 / C杂)= 主成分斜率 / 杂质斜率 = f杂 / f主 (3)、以主成分作参照,以相对保留时间定位,自身对照浓度与杂质限度相当,自身对照主成分峰高为满量程10%-25%,峰面积RSD≤10%(杂质含量小于0.5%)、峰面积RSD≤5%(杂质含量0.5%-2.0%)、峰面积RSD≤2%(杂质含量大于2.0%),主成分的保留时间的2倍。——《药典2010年版》

4、样品与内标物的质量比例确定了,混合后不论体积是否准确定容,均不影响最终结果的计算;即,称量过程准确,混合之前移液体积准确,那么混合后体积是否准确定容均不影响结果;即使对照溶液与样品溶液的内标物浓度不一样(但是要相近),也不影响最终结果计算(因为混合时样品与内标物的质量比例确定了,无论体积怎么变都是恒定的比例)。

内标法原始公式:

m布洛芬对照m布洛芬样品A布洛芬对照A布洛芬样品?m内标对照m内标样品A内标对照A内标样品

C布洛芬对照C布洛芬样品

A布洛芬对照A布洛芬样品?C内标对照C内标样品A内标对照

5、自身对照法

A内标样品溶剂峰扣除(若溶剂峰与杂质未分离)。 6、面积归一化法

出溶剂峰以外的总色谱峰面积。

F值跟色谱条件是捆在一起的,色谱柱的变化影响可能不太大,不过流动相的改变很可能造成大变化。尤其是一个有离子对另一个没有的时候,此时,就需要重新考察相对因子了。

参考文献:

http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110824/3483845/ http://www.dxy.cn/bbs/topic/20158663?onlyHost=1 http://www.dxy.cn/bbs/topic/17830768?ppg=1&age=0#0


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