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实验一 生物化学实验基本知识与操作
一、课堂目标
1．简述生化实验的五点基本知识
2．动手练习三种吸量管的使用，培养严谨的科学态度 3．选择弹动混匀法做操作练习，使试管内溶液混匀 4．仔细观察老师使用离心机的示教过程，并练习使用。
二、生物化学实验基本知识
1．实验前做好预习 每次实验课前应首先复习与实验有关的理论知识，然后认 真阅读实验指导，明确课时目标，了解实验原理、操作程序及实验中应注意的事项。 2．实验中要认真操作、仔细观察 实验时要求学生严格按照实验指导和教师的 要求，一丝不苟地进行操作，仔细观察和分析实验中出现的各种现象，如实地将实验 结果、数据填写在记录本内。
3．正确使用和爱护仪器 实验时须遵照教师要求，严格按操作规程正确使用每 种仪器。贵重仪器未经允许不得随意搬动，如不慎损坏，应及时报告指导老师。 4．保持实验室的整洁和秩序 遵守实验室规则，实验时保持室内安静。实验仪 器及用具必须洁净，实验试剂的排列应整齐有序。勿将试剂药品洒于桌面、地上或它 处。废物及强酸、强碱溶液应适当处理，以防堵塞和腐蚀水管。实验结束，做好清洁 工作，注意关断水，电源，关闭好门窗。 5．认真填写实验报告
三、生物化学实验几项基本操作
1．吸量管的选择和使用
(1)刻度吸管 常见容量有l0ml、5ml、2m1、1ml、0.5ml等数种。通常将管身标 明的总容量分刻度为100等分。常选用与移取非整数量的试液，因厂家不同，有分刻度 到尖端和刻度不到尖端的两种。如刻度到管尖的，通常在管壁上标有“吹”字，放液 时必须在容液流完后吹出残留于吸管尖端的试液。使用前先认明。
(2)移液管 吸管中间膨大，管壁只有一条总量标线，准确度较高，常用作移取 整数量的试液。常见规格有50ml、25m1、l0ml、5ml、2ml和lml等容量。操作时在放 出试液后，吸管尖端在容器内壁上仍要停留10~15秒钟。
以上两种吸管使用方法如下：用右手拇指和中指靠住吸管标线以上部分，将管尖 插入所要移取的试液液面下约lcm处。左手持洗耳球，对准吸管上口，慢慢吸取溶液 到刻度以上，立即以右手食指紧按吸管的上口。抽出吸管，用滤纸拭干管尖外壁，将 管尖靠在试剂瓶颈内壁，右手食指稍作放松，垂直缓慢地将多吸的液体放出至液面的 弯月面与标线相切时为止。立即用食指按紧，拿出吸管，垂直地移入准备好的容器中，
使管尖与容器内壁接触，让试液自然流出。
(3）微量定量移液管 此管由塑料制成，因形如手枪故又称为枪式移液管。是较 为精密的取液仪器，规格有1000μl、500μl、250μl、200μl、100μl、50μl等， 最小可为5μl。有固定式和可调式2种类型。目前在临床生化检验中已广泛使用，用于血清、
标准液等微量液体的取样和加液。一管可用多次，每次只需更换塑料吸液嘴。
使用方法：正式使用之前，在不吸液状态下，连续按动多次，以保持管内空气工 作负压恒定。使用时先将吸液嘴套在移液管尖，轻轻转动，以保证密封。然后垂直地 握住移液管，将按钮按到第一停止点，并把吸液嘴浸入到液面下2～3mm，缓慢地放 松按钮，使之复位。1秒钟后取出移液管，即完成取样。最后将吸液嘴移至备好的容 器壁上，缓慢地把按钮按到第一停止点，待l秒钟后再完全按下按钮，排尽全部液 体。吸液嘴沿容器壁向上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成一次操作过程。 使用另一种试液，应更换一支塑料吸液嘴。不使用时，应套上吸嘴，以保持管内清 洁。对于可调式微量移液管，使用时按钮上的标线必须对准所需容量的刻度线。 2．试管中液体混匀的方法
实验中，试管内每加入一种试剂参加反应，必须充分混匀。混匀的方法通常有以 下几种：
（1）少量液体的混匀可将试管轻轻振摇或摔动即可。
(2 ) 试管内液体较多时，可采用弹动混匀法，以一手持试管，另一手指拨动试管 底部，使管内溶液作旋转流动。
(3 )具塞试管内盛有多量液体时，可采用倒转混匀。
无论用哪一种方法混匀，都应防止试管内液体溅出或被污染。严禁用手指堵塞管口 的混匀动作。
3．离心机使用方法
选用普通台式电动离心机(1000—4000转／分)
(1 ) 取出离心机的全部套管，在无负荷条件下，开动离心机(3000转／分)，检查 转动是否平稳。
(2 ) 检查套管与离心管大小是否相配，套管底是否铺好软垫，套管底部有无碎玻 片或漏孔(如有则取出或用蜡封孔)。
(3 ) 检查合格后，将盛有离心液的离心管2支分别放入离心套管中，然后在粗天 平上进行平衡，对较轻一侧可用滴管往离心管与外套管之间隙加水，直至两侧重量相 等为止。
(4 ) 将已平衡的一对离心套管(连同其内容物)按对称方法放入离心机的插孔 中。不用的套管取出，盖上机盖，开动离心机。扭动旋钮时须逐步增加转速，直至所 需标准。离心完毕，将转速旋钮逐步扭回至零。待离心机自动停稳(不可用手按压) 后，取出离心管。
四、实验报告
1．如实回答，填写下列各题空格
2
(l ) 你在实验课前是否认真阅读了本实验项目的实验指导?答：___________ (2）你动手操作过哪些吸量管的使用练习?答：__________________
（3）你是在第_________次的练习中，首次成功地用__________吸量管准确移取了试液。 （4）你是否进行了弹动混匀法练习?答：________________如有，简单谈谈效果和感受：______________________________。
2．简要回答 离心机在生化实验中常作什么用途?
实验日期：____月 ____日
评分____________ 3
评改老师___________
实验二 ７２１型可见分光光度计使用
一、课堂目标
1．说一说什么是比色法?什么是分光光度法。
2．正确使用721分光光度计，测定未知溶液的浓度。树立热爱科学和爱护公 物的精神。
3．领会朗伯—比尔定律推导的公式，
二、实验原理
有色溶液颜色的深浅与其所含有色物质的含量成正比关系。在定量分析中，利用 比较有色物质溶液的颜色深浅来测定物质含量的分析方法称为比色法。
物质的颜色是由于物质吸收某种波长的光线以后，通过或反射出某种颜色的结 果。利用物质对一定波长光线吸收的程度测定物质含量的方法称为分光光度法。 分光光度法依据朗伯—比尔定律。设一束单色光I0射入溶液，由于部分光线被 溶液吸收，通过的光线减弱为It，则It/ I0之比为透光度(T)。透光度的倒数(1/T)反 映了物质对光的吸收程度、一般取(1/T)的对数值，作为吸光度，用A表示。又可 称消光度(E)或光密度(OD)。
依据朗伯—比尔定律的推导，溶液吸光度的大小与溶液的浓度(C)及液层厚度 (L)的乘积成正比。即A＝KCL
K为常数。在实际比色时，使用完全相同的比色杯。测定同一种物质，则标准溶液 液A标和待测溶液A测的公式中，K值和L值都是相同的，因而 A标：A测 = C标 ：C测 A测
则C测= A标 ×C标
式中，A测与A标 可在比色时读出数值，C标为已知标准液浓度。进而可求出未知 待测溶液的浓度(C测)
三、721分光光度计的基本结构
通电后，当光源发出的复合光透过单色光器后衍变为各种不同波长的单色光，单 色光透过比色皿时，一部分光线被有色溶液吸收，未被吸收的部分照射到光电检测器 上，进而将这种讯号的强度变为电信号的大小，最后经放大，由显示部分显示出测定 结果。
光源 → 单色光器 → 比色皿 → 光电检测器 → 放大 → 显示
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