班级 姓名 第 组 41多聚酶链式反应扩增DNA片段练习 命题人 赵雨润 审核人 赵雨润
一． 选择题
1．TaqDNA聚合酶的特点是（ ）
A．耐高温 B．耐强酸 C．耐强碱 D．不耐热 2．DNA的复制需要引物，其主要原因是（ ） A．可加快DNA的复制速度
B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合
C．引物的起来５/端有助于DNA聚合酶延伸DNA链 D．DNA聚合酶只能从引物的3/端延伸DNA链 3．下列关于PCR引物的说法中，不正确的是（ ）
A．引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补并能引导DNA模板的互补链合成
的脱氧核苷酸序列
B．引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得 C．DNA聚合酶只能使DNA链从引物的31端开始向引物的51端延伸 D．引物的3/端必须具有游离的—OH基团
4．PCR一般要经过30多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应。由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时，将（ ） A．仍与引物Ⅰ结合进行的DNA子链的延伸 B．与引物Ⅱ结合进行的DNA子链的延伸
C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸 D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成DNA子链
5．PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是（ ）
A．反复洗涤 B．避免外源DNA污染 C．高压灭菌 D．在—20℃ 储存 6．下列操作过程错误的是（ ）
A．PCR实验使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等使用前必须进行高压灭
菌
B．PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在—20℃储存 C．PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后迅速融化
D．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更
换
7．在PCR反应中，只有一个DNA的片段作为模板，经过一次循环后，含引物Ⅰ的DNA 单链点DNA总链数的（ ）
A．1/2 B．1/4 C．1 D．1/8 8．关于DNA复制，下列叙述正确的是（ ）
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A．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从5′端延伸DNA链 B．DNA复制不需要引物
C．引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D．DNA的合成方向总是从子链的3′端向5′端延伸
9．基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么在扩增仪中放入咆嘧啶脱氧核苷酸的个数至少是（ ）
A．640 B．8100 C．600 D．8640 10．DNA的羟基（—OH）末端称为（ ）
A．3′端 B．5′端 C．1′端 D．2′端 11．PCR操作中，从第二轮循环开始扩增的DNA片段（ ）
A．固定长度 B．一端固定 C．都不固定 D．不能确定 12．下图是哪次循环的产物（ ）
A．第一次循环 B．第二次循环 C．第三次循环 D．第四次循环
13．PCR利用了DNA的 原理，来控制DNA的解聚与结合（ ）
A．特异性 B．稳定性 C．热变性 D．多样性 14．PCR过程中DNA复性所需的温度条件为（ ）
A．90 ℃以上 B．72 ℃左右 C．80 ℃左右 D．50 ℃左右 15．PCR具体操作时用（ A．微量离心管 B．微量移液管 C．玻璃试管 D．塑料瓶 16．下列各项符合PCR条件的是（ ）
①稳定的缓冲溶液环境②DNA模板 ③合成引物 ④四种脱氧核甘酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥限制性内切酶 ⑦温控设备 A．①②③④⑤⑥ B．①②③④⑤⑥⑦ C．③④⑤⑥⑦⑧ D．①②③④⑤⑦ 17．PCR的特异性主要取决于（ ）
A．DNA聚合酶的种类 B．循环周期的次数
C．引物序列的结构和长度 D．反应体系中摸板DNA的量 18．DNA复制过程中前提是（
A． B．催化合成DNA C． D．4种脱氧核苷酸 19．DNA合成方向是（
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班级 姓名 第 组 A．从子链的3′端向5′端延伸 B．从引物的5′端开始延伸 C．从子链的5′端向3′端延伸 D．以上皆可
20．细胞增殖过程中DNA含量会发生变化。通过测定一定数量细胞的DNA含量，可分析
其细胞周期。根据细胞DNA含量不同，将某种连续增殖的细胞株细胞分为三组，每组的细胞数如下图。从图中所示结果分析其细胞周期，不正确的是（
A．乙组细胞正在进行DNA复制 B．细胞分裂间期的时间比分裂期长
C．丙组中只有部分细胞的染色体数目加倍 D．将周期阻断在DNA复制前会导致甲组细胞数 二．非选择题
21．Taq DNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的，该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明，PCR反应时变性温度为95 ℃，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR的前提条件，也是PCR技术能迅速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶还具有逆转灵活性，其作用类似于逆转录酶。Taq DNA聚合酶表现为Mg2+依赖，该酶的催化活性对Mg 2+浓度非常敏感。测定结果为MgCl2浓度在2.0 mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性，Mg2+过高就抑制酶活性，因而MgCl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度。
(1)Taq DNA聚合酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以________加入，________（填“需要”或“不需要”）再添加。
(2)影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度、时间和TaqDNA聚合酶浓度外，从材料中可知，还应有________。
(3)这种嗜热细菌能够在热泉中生存，这是________的结果。
(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________。假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占________。
22．近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如下图），在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
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(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为________，在细胞中是在________酶的作用下进行的。
(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2条DNA分子，此过程中原料是________，遵循的原则是________________________________。
(3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的________和________。
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(4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用N标记的DNA分子放入试管中，1415
以N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次以后，则N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为________。
23．在遗传病诊断及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品DNA含量太低
（1）在相应的空格内写出引物2，并在复性这一步骤中将引物2 （2）在相应的空格内写出循环一次后生成的DNA
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（3）若将作为原料的四种脱氧核苷酸用P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点。 。
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班级 姓名 第 组 练习41答案
1-----5ADCBC 6-----10CBCBA 11-----15AACD（AB） 16-----20DBCCD
21（1）一次性 不需要 （2）Mg2+浓度 （3）长期自然选择 （4）基因突变 1/2 22（1）氢 解旋 解旋 （2）4种脱氧核苷酸 碱基互补配对原则 （3）温度 酸碱度 （4）1/8 23（1）5′—G—A—OH HO—A—G—5 5′—G—G┄┄┄T—C—3
（2）3′—C—C┄┄┄A—G—5′ 5′—G—G┄┄┄T—C—35′—G—G┄┄┄T—C—3′ 3′—C—C┄┄┄A—G—5
（3）每个DNA分子各有一条链带32
P标记
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