2019年
考点32 酶的应用、DNA的粗提取与鉴定
1．构建酶的应用网络
易错警示 (1)直接使用酶、固定化酶和固定化细胞的比较
项目 适用方法 营养 缺点 影响产品质量 催化效率高，低能耗，优点 低污染 实例
直接使用酶 固定化酶 物理吸附法或化固定化细胞 包埋法 学结合法 不需要 酶易失活，难以回收，不需要 只能催化一种化学反应 可以回收利用，提成本低，操作容易 高产品质量 固定化葡萄糖异果胶酶 构酶 固定化酵母菌细胞 需要 反应物不易于接触，反应效率下降 2019年
(2)制备固定化酵母菌细胞的2点说明 ①实验注意事项
a．海藻酸钠溶化时要用小火或间断加热，避免海藻酸钠发生焦糊。
b．将溶化好的海藻酸钠溶液先冷却至室温，再与酵母菌细胞混合，避免高温杀死酵母菌细胞。
c．制备固定化酵母菌细胞时，应将配制好的混合液用注射器缓慢滴加到CaC12溶液中，而不是注射，以免影响凝胶珠的形成。
②海藻酸钠溶液的浓度对包埋酵母菌细胞数量的影响 a．浓度过高，将很难形成凝胶珠。
b．浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母菌细胞的数量少。 2．DNA的粗提取与鉴定操作流程
材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织 ↓
破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞→加蒸馏水→用玻璃棒 搅拌→用纱布过滤→收集滤液 ↓
去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 ↓
DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液 ↓
DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5 min，溶液变成蓝色 易错警示 DNA的粗提取与鉴定实验中的“2、4、4”
①加到鸡血细胞液中，使血细胞吸水涨破；②加到含DNA的2 mol/L加蒸馏 的NaCl溶液中，使NaCl溶液的物质的量浓度稀释到0.14 mol/L，使水2次 DNA析出 ①过滤血细胞破裂液，得到含细胞核物质的滤液；②过滤用2 mol/L用纱布 过滤4次 的NaCl充分溶解的DNA，滤去溶液中的杂质；③滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)；④过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液 用NaCl 溶液4次 ①加2 mol/L的NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质；②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出；③用2 mol/L的NaCl溶液，溶解滤取的DNA
2019年 黏稠物；④用2 mol/L的NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA
题组一 酶的应用
1．(2018·江苏七市三模)下表是某校兴趣小组以某品牌洗衣粉为材料进行的实验探究，相关叙述正确的是(多选)( )
洗净污渍所需实验组 1 2 3 4
A.各组实验中洗涤物、水量相同可防止无关变量差异影响实验结果 B．本研究的课题之一是探究某品牌加酶洗衣粉的最适洗涤温度
C．在观察污渍是否洗净时，要先将洗涤物用清水漂洗几次，晾干后再观察 D．实验结果表明添加酶制剂和适当升高洗涤温度有利于提高去污效果 答案 ACD
解析 分析表格信息可知，该实验的自变量为洗涤温度、加酶洗衣粉和普通洗衣粉，其他变量如水量、洗涤物等为无关变量，无关变量的变化会影响实验结果，A正确，B错误；洗涤物用清水漂洗后可洗去附着在洗涤物上的污渍，晾干后更易观察比较，C正确；从表中信息可知添加酶制剂和适当升高洗涤温度有利于提高去污效果，D正确。
2．(2018·江苏苏、锡、常、镇三模)下列关于酶制剂和固定化酵母细胞的叙述，正确的是( ) A．从酶的固定方式看，吸附法比交联法对酶活性影响大 B．可用海藻酸钠包埋消化酶制成多酶片用于缓解消化不良症状 C．将海藻酸钠凝胶珠用无菌水冲洗，主要目的是防止杂菌污染
D．探究不同加酶洗衣粉洗涤效果实验中，水温和浸泡时间都属于无关变量 答案 D
解析 交联法是将酶相互连接起来，而吸附法是将酶吸附在载体表面上，可见交联法对酶活性影响较大，A错误；消化酶分子较小，易从包埋材料中漏出，因此一般不用包埋法固定消化酶，B错误；将海藻酸钠凝胶珠用
洗涤物(等量) 油污布 油污布 油污布 油污布 洗涤温度 30 ℃ 30 ℃ 5 ℃ 5 ℃ 洗衣粉(等量) 加酶 普通 加酶 普通 水量 时间 2 L 2 L 2 L 2 L 4 min 7 min 9 min 8 min 2019年
无菌水冲洗，主要目的是洗去CaCl2，C错误；探究不同加酶洗衣粉洗涤效果实验中，不同加酶洗衣粉是实验的自变量，而水温和浸泡时间等都属于无关变量，D正确。
3．(2018·南通考前卷)某科研小组采用80 ℃水浴溶化海藻酸钠，固定黑曲霉孢子(含β-葡萄糖苷酶)，并进行相关催化实验，请分析回答问题：
(1)此实验过程中采用80 ℃水浴代替小火或者间断加热法溶化海藻酸钠，其优点是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。
溶化的海藻酸钠加入黑曲霉孢子悬浮液前一定要进行________处理，海藻酸钠的最终质量分数需控制在3%，原因是_____________________________________________________
________________________________________________________________________。 (2)实验过程中，初形成的凝胶珠放在
CaCl2溶液中静置
30 min，目的是
________________________________________________________________________。
(3)β-葡萄糖苷酶能催化大豆苷水解为大豆苷元，pH和温度对游离孢子和固定化凝胶珠中β-葡萄糖苷酶活性影响的结果如图表所示，由图表可知：研究pH和温度对葡萄糖苷酶活性影响时，温度和pH应分别控制为________、________；与游离孢子相比，固定化凝胶珠中β-葡萄糖苷酶的pH适宜范围________，热稳定性________。
转化率 处理温度/℃ 游离孢子 30 40 50 60 70 80 90
固定化凝胶珠 100 100 99 98 92 50 10 100 99 98 65 29 5 0
