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人用狂犬病疫苗（Vero细胞）细胞制文件编码 SOP-SC-KY024-00 文件名称 颁发部门 生产管理部 备标准操作规程 起 草 人 审 核 人 批 准 人 起草部门 审核部门 批准日期 生产管理部 质量管理部 起草日期 审核日期 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 生效日期 分发部门 生产管理部、狂犬疫苗车间
目的：制定和规范Vero细胞制备的程序，保证生产用细胞质量。 范围：人用狂犬病疫苗生产用细胞的制备。 责任：细胞组全体人员对本规程实施负责。 程序： 1．材料
名称 规格 1.1MEM 6L/瓶 400ml/瓶 1.2精制小牛血清 400ml/瓶 1.33%谷氨酰胺 100ml/瓶 50ml/瓶 1.4庆大霉素溶液（1万单位/ml） 200ml/瓶 50ml/瓶 1.57.5%碳酸氢钠溶液 400ml/瓶 50ml/瓶 1.60.02íTA溶液 400ml/瓶 1.775%乙醇溶液 1.83%甲酚皂溶液 1.90.1%新洁尔灭溶液 1.100.85%生理盐水溶液 1.11注射用水（本室自制） 1.12二甲基亚砜
以上液体配制方法各自液体配制标准操作程序编号： 2．设备
2.1转瓶机 45瓶/台 2.24℃冰箱 1台 2.3-20℃组合式冰库 1个
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2.437℃孵箱 1台 2.537℃恒温室
2.6不锈钢止血钳子 规格：20cm 16cm 2.7液氮罐 2.8不锈钢工作台 2.9不锈钢边台
2.10不锈钢双层车 2.11喷灯及管道
2.12不锈钢盒子 2.13倒置显微镜 2.14乙醇罐
2.15大不锈钢盒 2.16小不锈钢盒 2.17栓盒 2.18安瓶封口器 2.19不锈钢单层车 3．器具
3.1吸管 3.2吸耳球 3.3250ml 瓶 3.4500ml 瓶 3.5100ml 瓶
3.6方瓶、 大方瓶 3.73L瓶 3.810L瓶 3.9安瓶 3.10分液管道
大 小 1台 1 ml 2ml 5ml 10ml 1ml 10ml 吉林迈丰生物药业有限公司 第 3 页 共 12 页
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3.11中试管架
3.12青瓶 10ml 3.13废液缸 3.16方瓶不锈钢盒 4．辅助材料 4.1灭菌纱布 4.2硫酸纸 4.3绳 4.6无毛布 4.7胶布 4.8剪刀 4.9裁纸刀 4.10封口膜 4.11砂锯片 4.12二连管（球） 4.13记号笔 4.14方瓶架 4.15高压灭菌指示卡 4.16镊子 4.17脱脂棉 4.18细胞计数板 5．操作步骤
5.1生物反应器用细胞的制备（以制备900ml细胞悬液为例） 5.1.1细胞的复苏 5.1.1.1物品准备
5.1.1.1.14号栓、翻帽栓的准备
从干燥室取出20个4号栓，装入铺好无毛布的饭盒内，从干燥室取出20个翻帽栓，
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人用狂犬病疫苗（Vero细胞）细胞制文件编码 SOP-SC-KY024-00 文件名称 颁发部门 生产管理部 备标准操作规程
装入铺好无毛布的饭盒内放入高压灭菌指示卡，盖好无毛布及盒盖，绑好。使用前121℃60分钟高压灭菌处理。
5.1.1.1.21ml、5ml、10ml吸管的准备
从干燥室取出1ml吸管放入吸管筒，准备1筒；将5ml吸管放入吸管筒，准备2筒；将10ml吸管放入吸管筒，准备2筒。使用前180℃2小时干热灭菌处理。
5.1.1.1.3250ml盐水瓶、500ml盐水瓶、大方瓶的准备
取洁净干燥的10个250ml盐水瓶、10个500ml盐水瓶、10个大方瓶，用2层硫酸纸包住瓶口，用绳绑紧，放入铺好硫酸纸的不锈钢盒内，盖上硫酸纸及盒盖，绑好。使用前180℃2小时干热灭菌处理。
5.1.1.1.4细胞：为V134代细胞，数量1支由2人复核检查其名称，批号，代次，日期，检查合格后填写相关的领用记录方可使用。
5.1.1.2工作环境
5.1.1.2.1仪器、设备运行，物品准备情况、灭菌指示卡、生产区状态都符合规定. 5.1.1.2.2操作人员按《进出洁净区标准操作规程》进入万级洁净区，打开层流罩，净化30分钟。
5.1.1.3复苏液的配制
配方：MEM+20%小牛血清+1%谷氨酰胺+1%庆大霉素溶液+2.5%NaHCO3
配制方法：取已干热灭菌过的10ml吸管一筒，在百级操作台上将吸管筒的筒盖取下，取出10ml吸球在火上烧一下，套在10ml吸管头上，取已灭菌的250ml空瓶一个，以无菌方法将瓶口打开，将瓶口倾斜30度角放在以准备好的配液架上，然后取MEM 400ml一瓶，打开翻帽栓的外帽，将瓶口在火焰上转圈烧一下，取下翻帽栓弃入不锈钢桶中，再烧一下瓶口，一手把住MEM瓶的瓶底，瓶签朝上，瓶身倾斜30度角，另一只手拿出套有吸球的10ml吸管，注意管身不能碰到任何暴露在外的物品，在火焰的保护下以无菌操作方法吸取MEM75.5ml加入到配液架上的250ml空瓶中，然后用同样的无菌操作方法分别吸取小牛血清20ml、谷氨酰胺1ml、庆大霉素溶液1ml、NaHCO3 溶液2.5ml加入到装有75.5ml MEM瓶中，配制成100ml细胞维持液，取出饭盒内的翻帽栓，注意不能碰到翻帽栓的下部，将装有配制好的细胞生长液瓶的瓶口盖好，摇匀、备用。
