培养基

愈伤组织诱导培养基制备 以MS培养基母液为基础，向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ，维生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培养基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入40g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0。加入14g琼脂，将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积2L，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。 烟草叶片愈伤组织诱导 烟草 取一无菌培养皿，用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中，并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上，每瓶接种5小片，一共接种6瓶。接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周，然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶)。观察愈伤组织诱导结果，统计愈伤组织诱导率。 器官分化及植株再生培养 将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照，温度20-22℃条件下培养3周，统计愈伤组织再生植株情况。 愈伤组织诱导的总体情况 烟草愈伤组织诱导培养4周后，愈伤组织基本形成，即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。具体情况见表一中所示。6瓶培养物均有愈伤形成，且都未发生污染，但诱导率几乎各不相同。其中， 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅，在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%。由于实验过程中，外植体即烟草叶片取得偏小，接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡，使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小。 动物细胞培养基 RPMI1640培养基是一个全营养型培养基，广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养，如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。最初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。