（1）制备具药物浓度梯度的平板；
（2）在平板上涂布用诱变剂处理后的微生物单细胞悬液； （3）经培养后在某药物浓度区出现抗性菌落； （4）挑选抗性菌落后妥为保存，以供利用。 9．简述筛选有缺陷型突变株的四个基本环节。 答；（1）诱变剂处理； （2）淘汰野生型
（3）检出缺陷型：①抗生素法；青霉素可以淘汰野生型细菌；制枚9素可以淘汰野生型酵母菌或霉菌。②菌丝过滤法：可用于淘汰以菌丝状态生长的放线菌或霉菌的野生型菌株。
（4）鉴定缺陷型；可用僧长谱法鉴定。 10．简述原生质体融合过程。
答：（1）选择亲本：选择两株有特殊价值，并带有遗传标记的细胞作为亲本菌株。 （2）细胞脱壁：在等渗溶液中，用适当脱壁酶（溶菌酶用于原核微生物，蜗牛酶用于真菌）去除细胞壁。
（3）促进融合：适当离心，使原生质体聚集后，加入PEG（聚乙二醇）或用电脉冲等因素促融。
（4）胞壁再生用等渗溶液稀释融合细胞，把它们涂布在有助细胞壁再生和促进细胞分裂的基本培养基平板上，使其形成菌落。
（5）测稳定性：用影印平板法，把长在平板上的菌落影印在不同的选择性平板上，检验融合子遗传性状的稳定性。
（6）性能检测；测定融合子的生物学特性和生产性能。 11．简述酿酒酵母有性杂交操作要点。
答：（1）选择亲本：选择两株生产性状不同但互补优点的双倍体菌株做杂交亲本。 （2）促生子囊；分别接种在含乙酸钠或其他的产孢子培养基上，使其产生子囊。 （3）子囊破壁；用机械法（匀浆管中加硅藻土和石蜡油后研磨）或酶法（蜗牛消化酶0破碎子囊壁，使子囊孢子外出，然后离心收集。
（4）涂布孢子：将子囊孢子均匀涂布在平板培养基上，发芽后繁殖成菌落（单倍体）。 （5）有性杂交：把来自不同亲本，不同性别的单倍体细胞通过离心等方式使其相互密切接触，以提高杂交频率。
（6）选出良种：在有性杂交后的双倍体细胞中，选择优良的杂合子。 12．简述准性生殖的过程。
答：（1）菌丝联结：可发生在一些形态上无区别，但在遗传型上却有差别的不同种菌株的体细胞间；联结频率极低。
（2）形成异核体：菌丝联结后，两个不同性状的体细胞融合为一体，使细胞内同时存在两个细胞核，此即异核体。
（3）双核融合（核配）：细胞内的两个核可以发生低频率（10-7～10-5）融合，从而产生双倍体杂合子核，紫外线等里论化因素可提高核融合率。
（4）体细胞交换和单倍体化：由此可形成少数单倍体杂合子。某些理化因子还可提高其频率。
13.试述转化、转导和接合的区别要点。 答：区别见下表 转化 通过受体菌的细胞DNA转移方式 膜 包裹 毛 转导 通过噬菌体外壳蛋白的接合 在细胞接触后通过性纤参与细胞 转移DNA量 G+、G-菌 G+、G-菌 G-菌 20个基因 单向转移
— 20个基因DNA 20个基因到整个 ＋ ＋ 六、论述题
1．试从基因表达的水平解释大肠杆菌以葡萄糖和乳糖作为混合碳源生长时所表现出的二次生长现象（即分解代谢物阻遏现象）。
答：葡萄糖的存在可降低cAMP的浓度，影响RNA聚合酶与乳糖操纵子中启动子的结合（因为cAMP是RNA聚合酶与启动子有效结合所必须的），使转录无法进行，乳糖操纵子中的结构基因得不到表达，从而产生了分解代谢物阻遏诱导酶（涉及乳糖利用的三个酶）合成的现象。产生第一次生长现象。
当葡萄糖被利用完后，cAMP浓度上升，cAMP-CAP复合物得以与乳糖操纵子中的启动子结合，RNA聚合酶才能与启动子的特定区域结合并准备执行转录功能，这时由于存在乳糖，使阻遏蛋白失活，转录得以进行，结构基因得到表达，合成利用乳糖的三个酶，即β-半乳糖苷酶，渗透酶，半乳糖苷转乙酰基酶。细胞开始利用乳糖，产生第二次生长现象。
2．试述用Ames法检测致癌剂的理论依据和方法概要。
答：（1）Ames试验是一种利用细菌营养缺陷型的回复突变株来检测环境或食品中是否存在化学致癌剂的方法。其原理是：鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株在基本培养基的平板上不能生长，如发生回复突变变成原养型后则能生长。
（2）方法大致是在含有可疑化学致癌剂的试样中加入鼠肝匀浆液，经一段时间保温后，吸入滤纸片中，然后将滤纸片放置于基本培养基平板中央。经培养后，出现3种情况：①在平板上无大量菌落产生，说明试样中不含致癌剂；②在纸片周围有一抑制圈，其外周有大量菌落，说明试样中有较高浓度致癌剂存在；③在纸片周围有大量菌落，说明试样中有适量致癌剂存在。
