仪器分析实验部分
4．诺氟沙星（Norfloxacin，NFLX）
化学名为1-乙基-6-氟-1,4-二氢-4-氧代-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸。分子式：C16H18FN3O3 ，分子量：319.24。
图1-3 诺氟沙星的分子结构
Figure 1-3 Molecular Structure of Norfloxacin
三、仪器和试剂
WGY-10型荧光分光光度计；PHS-2F型酸度计；
诺氟沙星对照品（中国药物生物制品检定所）用二次蒸馏水配成5×10-3 mol·L-1储备液，使用时逐级稀释至所需浓度；不同pH值的BR缓冲溶液分别用0.04 mol·L-1的硼酸/磷酸/乙酸三酸储备液和0.2 mol·L-1的NaOH溶液配制而成，所用试剂均为分析纯。
四、实验步骤
1．缓冲溶液的配制 （1）三酸储备液的配制
2.71 mL 85%的正磷酸、2.36 mL冰醋酸、2.47 g硼酸混合，定容到1000 mL容量瓶中，备用。
（2）缓冲溶液系列的配制
分别量取0.2 mol·L-1的NaOH溶液7.5 mL、20 mL、35 mL、67.5 mL与三酸储备液100 mL混合，制成各种pH值的缓冲溶液，用酸度计分别测量各缓冲溶液的pH值。
2．pH值对诺氟沙星荧光光谱的影响
分别用上述五种不同pH值的缓冲溶液，考察pH值对诺氟沙星溶液荧光性质的影响。 3．标准曲线的绘制
分别量取一定量的诺氟沙星对照品溶液配成浓度为5×10-8 mol·L-1、5×10-7 mol·L-1、1×10-6 mol·L-1、2×10-6 mol·L-1、3×10-6 mol·L-1的标准系列溶液各50mL，在最佳pH条件下，绘制标准曲线。
4．样品的测定
（1）将10枚NFLX胶囊倾出药粉并仔细研碎，准确称量0.2 g的药粉于干净的烧杯
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中，溶解(加少量0.2 moL/L的NaOH或HCl)，定量转移到100 mL容量瓶中，定容至刻度。
（2）过滤溶液，弃去前10 mL滤液，保留后续滤液（用干燥洁净的烧杯承接）。 （3）用移液管取0.5 mL滤液转移到50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 （4）用移液管取2 mL稀释后的溶液,转移到50mL容量瓶中，用BR缓冲溶液定容,测定该溶液的荧光强度F。
五、数据记录与处理
1．记录实验条件
仪器型号；入射狭缝（nm）；出射狭缝（nm）；负高压（V）；最大激发波长（nm）；最大发射波长（nm）。
2．分析pH值对诺氟沙星荧光光谱的影响
3．列表记录诺氟沙星标准系列溶液的荧光强度，然后以荧光强度为纵坐标，标准系列溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，记录线性方程和相关系数。
4．记录样品溶液的荧光强度，然后在上述标准曲线上查得样品溶液中诺氟沙星的浓度，计算诺氟沙星胶囊中诺氟沙星的含量（以质量分数表示）。
cmol?L-1?2500?100.0mL?10?3?319.24ω%??100%mS六、思考题
1．荧光强度的影响因素有那些？
2．在荧光分析仪中，为何检测器和激发光源成直角设置？
七、仪器简介与操作步骤
1．荧光分析仪简介
有以下四个组成部件：激发光源、样品池、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器、检测器。
为了消除入射光和散射光的影响，荧光的测量在与激发光成直角的方向上进行。 （1）激发光源：在紫外－可见区范围，常用的光源是氙灯和高压汞灯。 （2）样品池:由低荧光材料制成，通常用石英。
（3）单色器:光栅，有两个：第一个用于选择激发波长；第二个用于分离出荧光发射波长。
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仪器分析实验部分
（4）检测器：用光电管或光电倍增管。
图1-4荧光分光光度计示意图
Figure 1-4 Schematic Diagram of Spectrofluorophotometer
2．WGY-10型荧光分光光度计操作步骤 按顺序打开氙灯、仪器主机、电脑。 打开操作程序，仪器进行初始化。
在操作界面上设置好工作模式、激发或发射波长、扫描范围、狭缝、负高压等参数。 放好待测溶液，点击“单程”即开始扫描，扫描完毕后对文件进行保存。 实验结束后依次关闭操作程序、仪器主机、氙灯。
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仪器分析实验部分
实验五 流动注射-化学发光分析法测定Cr3+的含量 (Flow Injection -Chemiluminescence Determination of the
Content of Cr3+ )
课时：(3)
一、实验目的
1.了解流动注射-化学发光分析仪的工作原理；
2.掌握用流动注射-化学发光分析仪测定溶液中Cr3+含量的方法。
二、实验原理
化学发光分析是利用某些化学反应所产生的光发射现象而建立的一种分析方法。化学发光的激发能由化学反应所提供。在反应过程中，某一反应产物的分子接受反应能被激发，形成电子激发态，当它们从激发态返回基态时，以辐射的形式将能量释放出来。这一过程表现为
A＋B→C*＋D C* →C + hν
鲁米诺在碱性溶液中被H2O2氧化，可以产生最大波长为425 nm的光辐射。
鲁米诺－双氧水化学发光反应能被许多过渡金属离子所催化，Cr3+就是其中之一，利用这一性质，建立了Cr3+的化学发光分析法。在选定的条件下，Cr3+的浓度和发光强度存在线性关系。
三、仪器和试剂
IFFM-D型流动注射-化学发光分析仪（西安瑞迈电子科技有限公司）； IFFS-A型多功能化学发光检测器（西安瑞迈电子科技有限公司）； HANGPING FA1604电子天平（上海天平仪器厂）；
鲁米诺标准溶液（1×10-5 mol·L-1）；H2O2标准溶液（0.04 mol·L-1）；Cr3+标准溶液（1×10-4 mol·L-1）。
四、实验步骤
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