37、、原生质体纯化有哪些方法？ 沉降法、漂浮法、不连续梯度法
38、原生质体的培养方法有哪些，各有何优缺点？
（1）固体培养法（平板培养法）（优点有利于对单个原生质体的胞壁再生和对细胞团形成的全过程进行定点观察。） （2）浅层液体培养法
（3）双层培养法（优点：使培养基保持很好的湿度，不易干涸。同时还可以定期注入新鲜培养基。原生质体长壁速度和分裂速度很快。）
39、影响原生质体培养的因素有哪些？简述原生质体培养的程序。
（1）原生质体的活力 （2）原生质体起始密度 （3）细胞壁再生速度 （4）培养基营养（5）培养条件（6）供试材料的基因型和生理状态
原生质体分离——原生质体纯化——原生质体培养——原生质体胞壁再生——细胞团形成——器官形成、植株再生。
40、试述植物细胞融合的程序。
1、植物原生质体分离（l）双亲原生质体制备（2）采用酶法分离原生质体（3）影响原生质体活力的各种因素
2、 原生质体纯化（1）筛网过滤（2）采用不连续梯度法纯化原生质体（3）质膜稳定剂和渗透压稳定剂 3、原生质体融合（l）盐融合法（2）高钙和高pH值法（3）聚乙二醇法（4）聚乙二醇和高钙、高pH值结合法（5）电融合法
4、细胞杂种的选择（1）互补选择法：白化互补、遗传互补、营养互补（2）可见标志选择法：凹穴培养皿法、微吸管法
5、愈伤组织形成器官分化植株再生（1）基本培养基筛选（2）激素种类和浓度调节（3）渗透压调节 6、杂种植物鉴定（1）与亲代形态特征比较（2）杂种植物核型分析（3）同工酶谱分析 41、植物细胞杂种选择的方法有哪几种？
（l）互补选择法①白化互补选择法 ②遗传互补选择法 ③营养代谢互补选择法 （2）机械选择法（可见标记法）A．凹穴培养皿分离法B．微吸管分离法 42、细胞大规模培养有哪些培养系统？
成批培养、半连续培养、连续培养
43、悬浮细胞系在继代培养中其群体生长规律。
45、用于制备人工种子的繁殖体主要有哪些？
46、控制胚性细胞同步分裂的方法有哪些？
（l）抑制剂法——用DNA抑制剂处理细胞培养物（2）低温法——低温处理调控胚状体的同步生长（3）渗透压法——利用渗透压调控胚状体的同步生长不同发育阶段的胚，具有不同的渗透压要求。（4）分离过筛法（5）通气法——利用气体调控胚状体的同步发生 47、人工种子的应用前景如何？ 需要解决那些问题?
随着研究的深入，限制其在商业应用中的问题将逐步得到解决，实现其诱人的应用前景，必将对作物遗传育种、良种繁育和栽培等起到巨大的推进作用。
1、贮藏问题 人工种子含水量大，常温下易萌发，也易失水干燥。 2、体细胞无性系变异，
3、成本问题 目前限制人工种子的商业利用的最大问题是成本， 4、繁殖体生产技术和人工种皮材料的研制 48、人工种子利用有何优点？
离体繁殖所具备的优势，可贮藏、因而可周年生产；可直接播种，减少了试管苗移栽在操作和管理上的困难，可机械化操作和常规的田间管理；可长距离运输，因此可建立相对集中的大型生产企业，实现资源和技术优化。
49、什么是动物细胞、组织培养技术？
50、动物细胞工程技术有哪些？那种技术是动物细胞工程的基础？
51、动物细胞培养基成分有哪些？ （1） 氨基酸类 （2） 维生素类
（3）大量元素----是调节培养液渗透压的主要成分。
（4）微量元素-----由血清提供的，在低血清或无血清培养液中，则需添加铁、铜、锌、硒等微量元素。 （5）葡萄糖----能量来源之一，也是某些氨基酸合成的原料。 （6）有机类（7）激素类----血清中含有许多激素。 （8）生长因子类
52、动物细胞培养基有哪几种？无血清培养基成分有哪些？
平衡盐溶液、天然培养基、合成培养基、无血清培养液（由基础培养液和附加成分组成。 取代血清的补充物：1）激素和生长因子；2）结合蛋白类； 3）低分子量营养因子；4）贴壁和铺展因子等。） 53、动物细胞冻存和复苏的原则是什么？慢冻快融 54、动物细胞体外培养的形态特征是怎样的？
55、动物细胞、组织培养的方法主要有哪些？
56、简述动物原代和传代培养方法
57、对体外培养细胞进行常规检查主要有那几方面内容？
细胞健康状况、培养液pH、微生物污染、细胞交叉污染、化学物质污染 58、动物细胞大规模培养的方法主要有哪些？
1．悬浮培养2．微载体培养3．包埋和微囊培养4、中空纤维法
59、怎样利用原生质体融合与培养技术制造新物种？
60、动物细胞培养过程中细胞生长要经过哪几个阶段？ 原代培养期 、传代期 、衰退期
61、动物细胞培养过程中细胞一代生长要经过哪几个阶段？ 潜伏期、指数生长期、平台期、衰退期
62、 任选一培养技术叙述从外植体到再生植株的完整实验过程。
63、根据其发育阶段，干细胞可以分为哪几种类型，根据其分化潜能的大小，又可分为哪几种类型？ 胚胎干细胞、成体干细胞
① 全能干细胞 ② 多能干细胞 ③ 定向干细胞
64、人工诱发动物细胞融合方法有哪些？动物杂交细胞的分离方法有哪些？ 1、生物诱导细胞融合 2、化学方法诱导细胞融合3、物理方法诱导细胞融合 4、激光诱导融合
非选择性筛选、选择性筛选
65、简述利用杂交瘤技术进行单克隆抗体大规模生产的技术步骤与要点。 1.亲本细胞的准备（致敏B淋巴细胞、骨髓瘤细胞的准备） 2.细胞融合形成杂交瘤细胞
3.杂交瘤细胞的筛选（采用HAT（含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)）选择性培养基） 4. 可分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的筛选：对每个含有杂交瘤细胞集落的生长孔中的上清液进行抗体检测，筛选出能够稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交细胞。检测方法：放射免疫测定、酶联免疫技术测定等
5. 杂交瘤细胞的克隆化培养：有限稀释法或软琼脂平板法
66、最常用的杂交瘤细胞杂交瘤细胞克隆方法有那些？（有限稀释法或软琼脂平板法）
