(3)如A为重组质粒溶液，将其导入原核期受精卵的方法是______________；如A为重组反转录病毒，还可采取________________方法。
(4)小鼠出生后可从其尾巴中提取________________分子，通过______________的方法，可检测出携带目的基因的小鼠。
(5)若目的基因进入细胞后插入一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是________________________________________________________________________。
答案] Ⅰ.(1)(四种)脱氧核苷酸
(2)F(反转录病毒序列) 限制酶和DNA连接酶(缺一不可) 抗生素A Ⅱ.(3)显微注射法 感染(侵染)
(4)DNA DNA分子杂交(或核酸分子杂交) (5)转基因小鼠间相互交配(或杂交) 22．(10分)多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟过程中PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：
(1)提取目的基因：
①若已获取PG的mRNA，可通过________法获取PG基因。
②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有________结合位点。得到的目的基因两侧需人工合成BamHⅠ黏性末端。已知BamHⅠ的识别序列如下图中甲所示，请在下图中乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是________。
(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，还需在培养基中加入________。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。
(3)由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄________，则可确定转基因番茄成功。
(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用________方法使子代保持转基因番茄的优良性状。
答案] (1)①反转录 ②RNA聚合酶 如下图所示
③使目的基因随质粒的复制而增加
(2)卡那霉素 适量植物激素 是否发生质壁分离 (3)天然PG基因转录的mRNA 长 (4)无性繁殖(或植物组织培养)
解析] (1)①由mRNA获得DNA的过程为反转录。②通过反转录得到的目的基因不含RNA聚合酶结合位点，为了保证转录的正常进行，需要在基因的上游添加RNA聚合酶结合位点。目的基因两端均有该限制酶识别的序列，所以酶切后的目的基因两端都有黏性末端。③可以利用PCR技术对目的基因进行扩增，也可以将重组质粒导入细菌中进行扩增。(2)可利用标记基因对基因的导入结果进行检测。植物激素是植物组织培养中不可缺少的组分。(3)因目的基因转录得到的是反义RNA，与天然PG基因转录得到的RNA可以互补配对，从而抑制正常的翻译过程。(4)由图示可知，目的基因整合到了细胞核染色体上，故获得的转基因植株相当于杂合子，有性生殖产生的后代不一定带有目的基因，可以利用无性繁殖技术确保子代保持转基因番茄的优良性状。
23．(10分)农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下图为农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题：
(1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是________，利用农杆菌自然条件下感染植物的特点，能实现________。具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在T－DNA片段，它具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞________上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到________(部位)即可。
(2)根据T－DNA这一转移特点，推测该DNA片段上可能含有控制________(酶)合成的基因。
(3)图中c过程中，能促进农杆菌向植物细胞转移的物质是________类化合物。 (4)要获取能表现出新性状的植株，d过程涉及的生物学技术是________。
(5)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还可采取________________________方法。(至少写出两种)
答案] (1)单子叶植物 目的基因导入到植物细胞 染色体的DNA T－DNA片段(内部)
(2)DNA连接酶、限制酶 (3)酚
(4)植物组织培养
(5)基因枪法、花粉管通道法
解析] (1)一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物，可感染双子叶植物和裸子植物。利用其感染性，可实现目的基因导入到植物细胞。真正可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上的是农杆菌T－DNA片段，因此目的基因必须插入到该部位才能成功。(2)根据T－DNA这一转移特点，可以推测该DNA片段能控制合成DNA连接酶、限制酶，以实现与双子叶植物细胞染色体DNA的整合。(3)植物细胞受伤后可产生酚类物质，促进农杆菌向植物细胞转移。(4)d过程涉及的生物学技术是植物组织培养，通过脱分化、再分化，最终形成植物体。(5)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外，还有基因枪法和花粉管通道法等。
24．(10分)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
表1 引物对序列表
P1 AACTGAAATGTAGCTATC 引物对A S2 TTAAGTCCATTACTCTAG S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG 引物对B S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG 表2 几种限制酶识别序列及切割位点表 限制酶 切割 位点 AluⅠ AG↓CT TC↑GA EcoRⅠ G↓AATTC CTTAA↑G PstⅠ CTGCA↓G G↑ACGTC SmaⅠ CCC↓GGG GGG↑CCC 请根据以上图表回答下列问题。 (1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是________。
(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？________。
(3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？________
(4)为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为________。 (5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到________种DNA片段。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到________种DNA片段。
