纤维素酶提取大豆多糖工艺
食品科学与工程 2010级1班 胡婷婷
一、问题的提出
1.怎样利用纤维素酶提取大豆多糖？
2.纤维素酶法与传统热水浸提法相结合提取的大豆的多糖的含量比单一热水浸提法提取大豆多糖含量高吗？
二、试验假设与理论依据
1.试验假设：纤维素酶法与传统热水浸提法相结合提取的大豆的多糖的含量 比单一热水浸提法提取大豆多糖含量高。
2.理论依据：用纤维素酶提取大豆多糖使由于纤维素酶能够降解植物中的纤维素，有效地破除细胞壁，使细胞中的多糖溶解出来，从而提高了大豆多糖的提取量，具备了传统热水浸提法不具有的有特点。
三、试验目标
1.了解纤维素酶提取大豆多糖的原理与条件；
2.掌握纤维素酶提取大豆多糖的方法。
四、试验对象、方法及手段
1.试验对象：大豆、纤维素酶
1.1 材料：葡萄糖、苯酚、三氯乙酸、石油醚、95%乙醇、乙醚、丙酮、浓硫酸
1.2仪器：25型小型粉粹机、恒温水浴锅、精密pH计、干燥箱、分光光度计、水流抽气机、冷冻离心机 2.试验方法：对比试验
3.检测手段：比较大豆多糖提取量的多少来判断哪种方法提取的大豆多糖含量高。
五、试验原则
用纤维素酶作适当处理可使细胞壁发生不同程度的改变, 如软化、
膨胀和崩溃等, 从而可改变细胞壁的通透性, 提高细胞内含物的提取率;
同时可简化食品加工工艺, 改善食品的品质。用纤维素酶提取大豆多糖使由于纤维素酶能够降解植物中的纤维素，有效地破除细胞壁，使细胞中的多糖溶解出来，从而使提取效果较好。如果利用纤维素酶法的同时与传统的热水浸提相结合，提取出的大豆多糖含量更高。
六、试验内容
纤维素酶法与热水浸提法相结合提取大豆多糖工艺流程：大豆→干燥→粉粹→筛分→酶解→水浴浸提→抽滤→多糖滤液→脱蛋白→离心除尘→醇尘→静置抽滤→洗涤沉淀→干燥→大豆多糖→称量计算。
热水浸提法提取大豆多糖工艺流程：大豆粉（10g）→石油醚去脂→干燥→乙醇浸提→真空抽滤→热水浸提→水体热真空抽滤→减压浓缩→去蛋白质→乙醇沉淀多糖→真空抽滤→真空干燥→称量计算。（料液比为1﹕20，90℃下浸提3h）
七、试验过程（试验步骤）
1.准备阶段
① 将已选好的大豆放入60℃干燥箱中，干燥至恒重后备用； ② 将已干燥的大豆进行粉粹，用筛网取出约30g的豆粉； 2.试施阶段
①称取筛分豆粉10g，在设计的条件下（最适酶解时间为50min,最适酶解
pH为5.5，最适酶解温度为50℃，最适酶添加量为1.0%）进行酶解； ②酶解完后在90℃水浴中浸提2h；
③浸提完后进行抽滤，测滤液的吸光度，并记录；
④然后在滤液中加1/10（体积比）的10%三氯乙酸，在0～4℃下放置24h； ⑤接着以3000r/min的速度离心15min，除去沉淀，得到透明的淡黄色多糖溶液；
⑥在以上得到的多糖溶液中加入3倍体积95%的乙醇溶液，大豆多糖会以絮状沉淀析出，然后在0～4℃环境下静置12h； ⑦将的到的大豆多糖进行抽滤，得到胶状白色大豆多糖；
⑧最后分别用污水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，并在55℃环境下干燥至恒重。
⑨多糖含量采用苯酚—硫酸法测定，各取1mL浓度为0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ug/mL的葡萄糖溶液于试管中，分别加入6%苯酚1.0mL，在分别加入浓硫酸5.0mL，摇匀，置室温中30min，然后在490nm下测吸光度，将结果制作标准曲线，横坐标为葡萄糖溶液，纵坐标为吸光度。
⑩计算：多糖含量/%=C*D/W*100%(C为样品溶液的葡萄糖重量ug；D为样品溶液的稀释倍数；W为样品的重量ug)
3.总结阶段
1.纤维素酶法与热水浸提法相结合的方法提取的大豆多糖含量达14.18%左右。而热水浸提法提取的大豆多糖含量达1.75%左右。
2.在提取大豆多糖过程中要掌握好试验所需的温度、时间，酶解时还应注意pH、酶添加量等问题。
