化验室操作指导书（受控） 8 3.6.2 取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用。
3.6.3 培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。 3.6.4 取出的物品掉落在地或误放不洁之处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用。
3.6.5 取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。 3.6.6 凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。
3.6.7 每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。 4 有毒有菌污物处理要求
微生物实验室所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。 4.1 经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。
4.2 经微生物污染的培养物，必须经121℃，30min高压灭菌。
4.3 染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中，最少浸泡24小时，再经121℃，30min高压灭菌。
4.4 涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，必须经高压灭菌后洗涤。
4.5 打碎的培养物，立即用5%煤酚皂液或石炭酸喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭干净。
4.6 污染的工作服或进行烈性菌试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。 5 玻璃器皿的清洗要求 5.1 目的
为了保证微生物实验顺利进行，保证实验结果的准确性，不影响实验进度，必须把器皿彻底清洗干净。
修订 1 2011－08－18
化验室操作指导书（受控） 9 5.2 注意事项
5.2.1 任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。
5.2.2 一般新的玻璃器皿用2%的盐酸液浸泡数小时，后用水冲洗干净。 5.2.3 用过的器皿应立即洗涤，放置太久会增加洗涤困难。
5.2.4 强酸、强碱及其它氧化物和有挥发性的有毒物品，都不能倒在洗涤槽内，以免污染环境水质，必须倒在废水缸中。
5.2.5 含有对人体有传染性病菌的器具，应先煮沸灭菌后再进行洗涤。
5.2.6 难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起，以免增加洗涤的麻烦。有油的器皿不要与无油的器皿混在一起，否则使本来无油的器皿沾上了油垢，浪费药剂和时间。 5.3 洗涤剂的种类：水、洗衣粉、柠檬洗涤剂、肥皂 5.4 洗涤方法
5.4.1 含有琼脂培养基的玻璃器皿的洗涤方法：事先应将器皿中的琼脂刮去，然后用清水洗涤，并用试管刷刷其瓶壁，以除去粘污在壁上的灰尘和油垢。用洗衣粉水洗去油污，然后用自来水冲洗。洗好后的器皿应倒置晾干或置于干燥箱中干燥至无水滴。
5.4.2 载玻片及盖玻片的洗涤法：新载玻片及盖玻片先在20%的盐酸溶液中浸一小时，然后用自来水冲洗2~3次，最后用蒸馏水换洗2~3次。用过的载玻片及盖玻片，应用纸擦去油垢，再放在5%的洗衣粉水中煮30分钟后立即用自来水冲洗，然后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用自来水冲洗至中性。
5.4.3 移液管、倒管的洗涤方法：新的移液管及倒管先在的５％盐酸溶液中浸一小时，然后用自来水冲洗几次，最后用蒸馏水换洗几次。用过的移液管、倒管先用自来水洗去表面的残液，再放在洗衣粉水中浸泡一小时以上，再用自来水冲洗至管内壁无残渣，最后用蒸馏水换洗次，晾干后入恒温干燥箱中烘干。 6 培养基、无菌水的制备
修订 1 2011－08－18
化验室操作指导书（受控） 10 6.1 基本原理
培养基的种类很多，不同微生物所需要的培养基不同。培养基制成后的物理状态可分为液体、固体、半固体三种类型。目前所用培养基均为已配制好的生物试剂和纸片。 6.2 器材
三角瓶、试管、烧杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、铝箔纸、角匙、杜氏小管、硅胶塞、电炉
6.3 培养基的种类
营养琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、伊红美兰琼脂培养基、马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(附加抗菌素)、平板计数琼脂、月桂基硫酸盐胰蛋白冻肉汤、煌绿乳糖胆盐肉汤、EC肉汤、高盐察氏琼脂、三糖铁琼脂等 6.4 方法步骤 6.4.1 培养基的制备：
6.4.2 称量：根据培养基的配方，称取适量药品于搪瓷杯中；
6.4.3 溶解：用量筒量取所需水量，置电炉上加热，一边搅拌，至完全溶解，加热至沸腾，拔掉电源，待冷却；
6.4.4 分装：根据不同需要，立即趁热分装入三角瓶或试管中，分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜，分装试管一般为管长的1/5（需根据试管的大小而定）。液体培养基如乳糖胆盐发酵培养基约分装10毫升左右。
6.4.5 塞硅胶塞：装好培养基的试管应塞上硅胶塞，松紧合适，紧贴管壁，不留缝隙，约1/2塞入内，这样即可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。 6.4.6 包装：三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎，试管集中于试管篓。 6.5 无菌水的制备：
6.5.1 用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水（稀释水）装入试管中。
6.5.2 用100ml量筒量取95ml蒸馏水（稀释水）装入150ml的三角瓶中。可置少许玻璃珠
修订 1 2011－08－18
化验室操作指导书（受控） 11 于三角瓶内，防止暴沸。
6.5.3 量取240ml蒸馏水（稀释水）于250ml的三角瓶中，塞上瓶塞用牛皮纸包扎好，高压灭菌备用。 7 设备使用原则
7.1 实验设备的使用由实验员严格按照操作说明书进行，其他人员不得随意操作。 7.2 实验设备的日常维护保养由实验员根据设备操作说明书进行，出现不可排除的故障时，经部门总经理批准，商请专业人员维修。
7.3 实验设备应定期进行计量检测，确保仪器的准确性。
7.4 实验员应爱护仪器设备，使用前应检查，使用后应及时清理清洁，并定期维护保养，下班前应检查设备电源是否关闭。
修订 1 2011－08－18
