实验守则
一、一般要求
1、预习:学生在实验课前应认真预习本实验指导以及教材有关章节,必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。
2、讲解:教师只对该实验内容的安排及注意事项进行讲解,让学生有充分的时间按实验指导的顺序进行独立的操作和观察。
3、独立操作与观察:实验一般都由学生独立进行,在实验中要按操作程序反复练习,以达到一定的熟练程度。
4、示教:有些实验备有示教。其目的是帮助学生对某些较难的操作过程和观察材料给予演示,学生建立初步认识后,再独立操作,仔细观察。
5、作业:实验报告必须根据各人的观察,以实事求是和一丝不苟的精神忠实地记录、分析、综合。不得抄袭教材或其他同学的报告。实验报告一般应于实验结束时呈交。它的形式可因实验内容而不同。
6、总结:实验结束后,一般由教师说明该次实验的主要收获及今后应注意的事项。
二、实验室规则和注意事项
1、学生上实验课时必须携带教材、实验指导、实验报告纸和文具,进入实验室要求穿好工作服,按规定座位入座。
2、实验开始前要检查所用仪器、材料、实验用品是否完好齐全。如有缺损及时向带课教师报告,自己不得随意调换仪器和实验用品。
3、实验时要遵守纪律,听从教师指导,保持肃静。有问题时举手提问,严禁彼此谈笑喧哗或随意走动,也不得进行和实验无关的其他活动。
4、实验时要遵守实验操作规程,严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。操作要正规,观察要认真仔细,边做边看、边想,及时完成实验报告。
5、要爱护仪器、标本和器材设备,注意节约实验材料、试剂和水电。如损坏了仪器或器材应主动报告,说明情况。
6、实验结束后,应自觉清理实验台面,认真清理好仪器、试剂及其他用品,放回原处。值日生要负责清扫地面,收拾实验用品,处理垃圾,关好水电、门窗后再离开实验室。
7、实验课不得迟到、早退或无故缺课。
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实验一 正常人类染色体核型观察及分析
一、实验目的
1、熟悉人类染色体的数目及形态特征。 2、掌握非显带染色体的核型分析方法。
二、实验原理
人类非显带染色体核型分析是染色体研究的一项基本内容,它的一般程序是先利用显微照相装置拍摄人类非显带染色体的图象,并放大成染色体照片,然后按照国际上统一的标准,根据染色体的长短、着丝粒的位置、随体的有无等特征,将人的全套染色体分组编号,并按顺序成对地将染色体剪贴,制成染色体核型图,然后确定染色体核型,这个过程就称为核型分析。利用核型分析可以检查染色体数目是否正常,并可发现较大的染色体结构畸变以及判定性别等。
ISCN规定,人的46条染色体中的44条为男女共有的常染色体,配成22对同源染色体,按1~22编号,根据染色体的长度和着丝粒的位置可分为A、B 、C、D、E、F、G等7个组,另外还有2条染色体为性染色体,男性为X、Y,女性为X、X。X染色体属于C组,Y染色体属于G组。
三、实验用品
1、器械:光学显微镜、剪刀、镊子、培养皿、擦镜纸、胶水或浆糊。 2、试剂:乙酸乙酯、香柏油。
3、材料:正常人染色体标本、中期染色体分裂相照片。
四、实验内容
(一)、正常人染色体标本形态观察
取染色体标本,先在低倍镜下寻找染色体分散良好的中期分裂相,然后转到油镜下仔细观察分析染色体的形态特征。镜下可见,中期细胞染色体都已纵裂成2条染色单体,称姐妹染色单体,由一个着丝粒相连,每条染色体以着丝粒为界又分为长、短臂。先计数染色体总数,然后识别染色体长、短臂及随体,区分中央着丝粒、亚中着丝粒、近端着丝粒染色体,再根据各组染色体的特征予以辨别。
按下述各组染色体的特征对染色体进行分组分析。
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A组:包括1~3号共3对,是最大的一组染色体,第l号为一对最大的中着丝粒染色体;2号较1号短些,为最大的亚中着丝粒染色体;3号为次大中着丝粒染色体,是A组中最小的一个。
B组:包括4号和5号染色体,均为亚中着丝粒染色体,短臂较短,彼此间难于区别。 C组:包括6~12号及X染色体,均为亚中着丝粒染色体,它们的大小差不多,彼此间难于区别,其中6、7、8、11及X染色体短臂较长,9、10、12号染色体短臂较短。X染色体大小介于7~8染色体之间。
D组:包括13、14、15号三对染色体,均为中等大小的近端着丝粒染色体,常有随体处于短臂的末端,彼此间难于区别。
E组:包括16、17、18号三对染色体,较易区分,16号为中着丝粒染色体,17、18号为亚中着丝粒染色体,18号最小,且短臂在E组中最短。
F组:包括19、20号染色体,是最小的一组中央着丝粒染色体,相互间很难区分。 G组;包括21、22号和Y染色体,是最小的近端着丝粒染色体,Y染色体是G组中最大的,且没有随体,长臂平行伸展。21、22常有随体,22比21要大些。
(二)、显微照片核型分析
每个人取2张相同的正常人中期分裂相染色体照片,首先辨别核型性别,一般根据C组和G组的染色体数目来判断,如果C组为16条染色体,G组为4条染色体,可初步确定该核型是46,XX;如果C组为15条染色体,G组有5条染色体,则可初步确定该核型为46,XY。然后将小张核型图片贴于报告单的上方空白处,以作对照。将大张图片中的每一条染色体逐条剪下,放到培养皿中,根据各组特征,按染色体短臂朝上,长臂朝下,着丝粒的位置在同一直线上的原则,分别以组、号顺序依次排列在培养皿中(一般先排列A、B、D、E、F、G组,C组可留在最后排列),检查无误后粘贴于核型分析报告纸上。最后写出分析结果、报告者、日期。正常男性核型写为:46,XY;正常女性核型写为:46,XX
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[附表] 分裂中期染色体分组编号和主要形态
组号 染色体号 形态大小 着丝粒位置 鉴别要求 A 1~3 最大 中央、亚中着丝粒 要求明确区分各号 B 4~5 次大 亚中着丝粒 要求不与其他组相混 C 6~12+X 中等 亚中着丝粒 要求按长短排列 D 13~15 中等 近端着丝粒 要求不与其他组相混 E 16~18 较小 中央、亚中着丝粒 要求明确区分各号 F 19~20 次小 中央着丝粒 要求不与其他组相混 G 21~22+Y 最小 近端着丝粒 要求21、22与Y区别
[作业]
1、参照镜下绘一个正常人染色体核型快速线条图,并标明1、2、3、16号,其余注明组别。
2、每人剪贴分析一个正常人染色体核型照片。
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