3.1.3 原位接种模型
原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动物的某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏。原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅内等原位接种方法。 3.2 动物分组
3.2.1 试验设阴性对照组、阳性对照组、治疗组。
3.2.2 治疗组设高、中、低三个剂量组。小鼠肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分组，裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100—300mm3后将动物随机分组。
3.2.3 动物数普通小鼠每组10只，裸鼠6只。 阴性对照组动物数为治疗组动物数×实验组数1/2 3.3 剂量设置
3.3.1 治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按4:2:1设置，高剂量使用最大耐受量或LD10的剂量。
3.3.2 阴性对照组给予相应的溶剂；
3.3.3 阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的抗肿瘤药物，
3.3.4 如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物时，必须选用该抗癌药物作为阳性对照药。
3.4 阳性对照药选择原则
疗效确切；与被试物质化学结构类似；与被试物质有类似的作用机理。 3.5 药物配制
溶于水的药物，用生理盐水或蒸馏水配制；如用酸、碱溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5N HCl)或碱(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，调节pH在4.5-9.0的范围内。用乙醇、丙二醇、吐温80、DMSO助溶的药物，或用吐温60、吐温80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纤维素制成混悬液的药物，可腹腔注射或口服，但必须设相同浓度的溶剂对照组。用注射用花生油配制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。 3.6 给药方案和给药途径
分组当日开始给药，根据不同药物的代谢动力学和毒性反应等确定给药方案。给药途径应与推荐临床用药的途径相同。 给药次数较多，或被试物质溶解性较差，
静脉给药有困难时，可考虑使用腹腔给药，但在评价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。 可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径。 4 评价标准 4.1 腹水瘤模型
接种给药后，观察和记录动物死亡时间，计算生存天数。如阴性对照组20%动物存活时间超过4周，表明腹水瘤生长不良，实验作废。
采用中位生存时间（即median survival time,MST）来评价每组的生存时间 ，其计算公式为：
每组鼠数的中间数-中间生存天数前死亡的鼠数 MST=（中间生存天数-0.5）+中间生存天数死亡的鼠数 治疗组与对照组的比较，采用T/C（%）来表示，计算公式为： T MST T/C % = ────×100% C MST
T MST：治疗组MST ；C MST：阴性对照组MST。
评价标准以125%为界，当T/C%≥125% 时。视为有效，反之则无效。 4.2 裸鼠移植瘤模型
推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周2-3次,每次测量同时还需称鼠重。 肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为： V = 1/2×a×b2 或π/6×a×b×c
其中a、b、c分别表示长宽高。两公式的相关性极好，可采用任一公式。 根据测量结果计算出相对肿瘤体积（relative tumor volume，RTV）， RTV = Vt / V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C（%）
TRTV
T/C % = ────×100% CRTV
TRTV：治疗组RTV ；CRTV：阴性对照组RTV。
疗效评价标准：T/C % >60 %为无效；T/C % ≤60%，并经统计学处理P<0.05为有效。
4.3 小鼠肿瘤模型
生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测量瘤径的评价方法。
生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克，或20%肿瘤重量小于400毫克，表示肿瘤生长不良，试验作废。 疗效评价公式：
给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重 肿瘤生长抑制率 = ───────────────── ×100% 阴性对照组平均瘤重
评价标准：
肿瘤生长抑制率<40% 为无效；肿瘤生长抑制率≥40%，并经统计学处理P<0.05为有效。 4.4 原位接种模型
不同原位接种模型可采用不同评价方法，主要有瘤重和生存时间评价法。如肝原位接种可用瘤重评价，颅内接种可用生存时间评价。评价方法、标准和注意事项同腹水瘤模型和小鼠肿瘤模型。 四、抗肿瘤药物的特殊要求
I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研究。非细胞毒类药物除完成体内外抗肿瘤试验，还应进行特定抗肿瘤作用研究。 1. 生物反应调节剂
药效学包括 ：体内抗癌试验和免疫功能研究。 1.1 体内抗癌试验注意点：
模型：裸鼠是免疫缺陷动物，一般应用正常免疫鼠肿瘤模型。
给药时间：可按常规给药，也可在接种前预先给药，接种后继续给药或停药。 105个瘤细胞/小鼠。?肿瘤细胞接种量：可比细胞毒类药物低一个数量级，一般为(1-5)
给药方法：可单独给药，也可与其它抗肿瘤药物合并使用，观察增效或减毒作用。 1.2 免疫功能试验方法
具有抑瘤作用的生物反应调节剂，还需作免疫功能测定,以明确其抑瘤作用是否与免疫功能调控有关。免疫功能测定包括细胞免疫和体液免疫两方面。 免疫功能测定有： （1） 巨噬细胞功能测定
（2） 天然杀伤细胞(natural kill cell) 测定 （3） 淋巴细胞转化试验
（4） 淋巴因子活化的杀伤细胞测定(lymphocyte- activated killer cell) （5） 各种细胞因子测定，如IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等。 （6） 迟发型超敏反应检测 2. 肿瘤耐药逆转剂 2.1 体外抗耐药活性试验
选择2-3对肿瘤耐药/敏感细胞株，采用MTT法或SRB法测定细胞毒性。一般在无毒剂量或相当于IC10的剂量下设三个剂量，并设立相应的阳性和阴性对照组。评价逆转效果用逆转倍数(fold reversal, FR)表示：FR=IC50(不加逆转剂)/IC50(加逆转剂)。 注意的方面：
耐药株的耐药性：耐药株因传代，尤其是撤药后耐药性可改变或消失；试验前必须对试验耐药株进行耐药倍数(FR)测定，确保试验的可靠性。若非逆转多药耐药 (MDR) 而是逆转单药耐药，则实验的瘤株中需有针对该药的耐药细胞株。 阳性对照药建议采用 维拉帕米 (verapamil) 10μM 环孢菌素A (cyclosporin A) 3μM 。
2.2 体内抗肿瘤耐药活性试验
