2．黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。
3．在DNA分离过程中，为何常常酚∶氯仿联用？
参考答案（A卷）
一、填空题
1. 目的基因，工具酶，载体，受体细胞 2. 5’→3’的聚合酶，3’→5’的外切核酸酶 3. 乙醇使DNA分子脱水 4. 接受外源DNA的生理状态 5. 核酸酶降解，化学降解，物理剪切 6. -70℃ 7. 识别位点，切割位点，平，黏性，Mg2+ 8. 枯草杆菌蛋白酶，5’→3’的聚合酶，3’→5’的外切核酸酶 二、单项选择题
1. a 2. c 3. b 4. b 5. b 6. b 7. a 8. d 9. c 10.d 11.c 12.a 13.b 14.c 15.c 16.b 17.a 18.a 19.a 20.b 三、判断题
1.× 2.× 3.× 4.× 5.√ 6.× 7.× 8.× 9.√ 10.√ 11.√ 12.× 13.× 14. × 15.× 四、简答题 1. 25%
2. GAATTC，AAGCTT，CTGCAG，因为它们是回文序列。 3. 引物1：（1）5’-GACCTGTGGAAGC 引物2：（4）5’-CAATCCCGTATG
4. 一种只取决于DNA的碱基顺序，即终止子序列；而另一种还需要 终止蛋白质（ρ因子）的参与。 五、问答题 1. PCR反应是在模板DNA、引物和dNTPs存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，它根据DNA半保留复制的原理，在体外模仿细胞内DNA复制的过程，首先使模板DNA变性，两条链解开，然后使引物与模板退火，二者碱基配对，DNA聚合酶随即以四种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。
进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。
2. 粘性末端连接的优点是实验操作简单，易于回收外源DNA片段。不足之处：（1）载体易自身环化；（2）用同一种限制酶产生的黏性末端连接不
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线 ： 号 学 ：订名 姓 ： 级 班 业 专装 ： 院 学 易定向克隆；（3）难插入特定的基因；（4）大片段DNA的重组率较低，即使用碱性磷酸酶处理了载体，载体也有成环的倾向；（5）用这种方法产生的重组体往往含有不止一个外源片段或不止一个载体连接起来的串联重组体，增加筛选工作的困难。
3. 酚与水有一定程度的互溶，单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，它不与水互溶，而与苯酚互溶，故可带去残留酚。
安徽农业大学2008―2009学年第一学期《基因工程原理》试卷（A卷）
考试形式: 闭卷，2小时，总分100分
适用专业： 06生物技术 考试时间： 2008.11. 题 号 一 二 三 四 五 总 分 得 分 得分 评阅人 一大题：填空题（共8小题，每空1分，共20分）
1. 年,Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到第一个Ⅱ类限
制性内切核酸酶，这个酶后来被命名为 ；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 。
2. Ⅱ类限制性内切核酸酶仅有内切核酸酶活性，而没有
活性，作用时需要 作为辅助因子。
3. 原核生物主要有两种类型的DNA连接酶： 连接酶和 连接酶。正常情况下只有 连接酶能够连接平末端的双链DNA。
4. 受体细胞的感受态是 ，诱导处理
E.coli通常采用的化学试剂是 。
5. 两个天然质粒pSC101和ColE1分别是 和 复制
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的质粒。其中第一个作为重组DNA载体的质粒是 。 6. pBR322质粒具有 和 两种抗性基因，而pUC
系列的载体仅有 抗性基因。
7. 在分离提取DNA的过程中，通常使用金属离子螯合剂EDTA，其目的
是 ，而使用异戊醇的作用是 。
8. 在Southern印迹中，DNA转移的速度主要取决于
和 。
得分 评阅人 二大题：选择题（每小题1分，共15分）
1. 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是（ ）。
（a）P．Berg （b）W．Gilbert （c）A．Kormberg （d）B．McClintock
2. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（ ）不 太恰当。
（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成
（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ型限制性内切核酸酶
（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 （d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
3. 限制性内切核酸酶可以特异性地识别和切割（ ）。
（a）双链DNA的特异碱基对 （b）双链DNA的特异碱基序列 （c）特定的三联密码 （d）以上都正确
4. 限制性内切核酸酶的星号活性是指（ ）。
（a）在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性 （b）活性大大提高
（c）切割速度大大加快 （d）识别序列与原来的完全不同 5. 下列限制性内切核酸酶中，选用（ ）时要考虑连接后外源DNA的插入方向。
（a）EcoRⅠ （b）EcoRⅡ （c）BamHⅠ （d）PstⅠ
6. 下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性（ ）？ （a）S1核酸酶 （b）Bal 31核酸酶
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（c）末端转移酶 （d）碱性磷酸酶
7. 用碱法分离质粒DNA时，因为（ ）所以可以被除去。 （a）染色体DNA断成了碎片
（b）染色体DNA分子量大，而不能释放 （c）染色体DNA变性后来不及复性 （d）染色体末同蛋白质分开而沉淀
8. DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（ ）。 （a） 将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键 （b） 作用时不消耗能量 （c） 需要Mn2+等二价辅助离子 （d） 也可以连接RNA分子
9. 关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（ ） （a） 在不同的宿主中具有不同的复制机制 （b） 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 （c） 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 （d） 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度
10.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（ ） （a） 噬菌斑颜色的变化 （b）cI基因失活造成噬菌斑的变化 （c） 对IPTG的分解能力 （d）对Xgal的分解与否
11.在利用lacZ失活的显色反应筛选中，IPTG的作用是（ ）。 （a）诱导宿主的α肽的合成 （b）诱导宿主的ω肽的合成 （c）作为酶的作用底物 （d）作为显色反应的指示剂
12.在切口移位标记DNA探针时只能使用（ ）。
（a）Klenow酶 （b）DNA聚合酶Ⅰ （c）T4 DNA聚合酶 （d）T7 DNA聚合酶
13.用下列方法进行重组体的筛选，只有（ ）说明外源基因进行了表
达。
（a） Southern印迹杂交 （b）Northern印迹杂交 （c） Western印迹杂交 （d）原位菌落杂交
14.用免疫化学法筛选重组体的原理是（ ）。
（a）根据mRNA同DNA的杂交 （b）根据DNA同DNA的杂交
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