实验诊断学---临床血液学检验
正常值：<40mg/L 意义：血管内溶血的指征
（5）血清结合珠蛋白测定（haptoglobin, Hp）
正常值：0.5~2.2g/L 溶血存在时，Hp减少。
（6）血浆高铁血红素白蛋白试验（methemalbumin test）
正常： 阴性
严重血管内溶血时呈阳性
（7）Hb尿测定（hemoglobinuria）
血管内有大量红细胞破坏，血浆中的游离Hb量超过1000mg/L时出现 正常值：阴性 溶血时阳性
（8）尿含铁血黄素试验（Rous test)
正常值：阴性 溶贫中阳性只占10~20%
2、红细胞代偿增生的证据 （1）外周血网织红?
（2）外周血涂片 红细胞大小不均，嗜多色性，Howoll-Jolly小体，Cabot环，有核红细胞 （3）增生性骨髓象 多色性红细胞 Howell-Jolly body
Howell-Jolly小体 Cabot环 3、溶血发生的部位 血管内溶血（严重溶血） 血管外溶血 血清胆红素 ↑ 正常或↑ 尿胆红素 正常或↑ 正常 血浆游离Hb 明显升高 正常/轻度升高 血清结合珠蛋白 ↓ 正常或↓ 血浆高铁血红素 常出现/轻者可 不出现 白蛋白复合物 不出现 血浆血红素结合 常减低/正常 正常 蛋白 含铁血黄素尿 （+）/（-） （-） 血红蛋白尿 可出现 不出现
4、确定溶血的原因
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实验诊断学---临床血液学检验
⑴ 红细胞膜缺陷的检验
① RBC渗透脆性试验(erythrocyte osmotic fragility test)
检测红细胞在不同浓度低渗NaCl溶液中的抵抗力，即检测红细胞渗透脆性。 RBC表面积/RBC容积比值与RBC脆性成反比。 ②自身溶血试验及其纠正试验
HS (Hereditary spherocytosis)时低渗溶液中的异常溶血 参考值：开始溶血0.42%~0.46% (NaCl液) 完全溶血0.28%~0.32% (NaCl液) ③ 酸溶血试验（Ham test）（acid serum hemolysis test） 特异性高，是国内外公认的PNH确诊试验
利用补体在弱酸性环境中激活，并攻击RBC膜，致溶血 。
受检者RBC + 正常血清（补体） ----------------- 溶血（+）-----说明受检者RBC对补体敏感性很高。 稀HCl、37℃30min ④ 蔗糖溶血试验（sucrose lysis test）
特异性敏感性均不如Ham试验，仅做筛选。 参考值：阴性 ⑵ 红细胞酶缺陷的检验 ①自身溶血试验及其纠正试验 变性珠蛋白小体生成试验 高铁血红蛋白还原试验 酶活性测定
G6PD缺陷 ：＋ATP：可纠正，但不能纠至正常 ＋G： 同上
?PK缺陷： ＋ATP：可纠正
＋G： 不纠正 ② 变性珠蛋白小体生成试验
受检RBC＋乙酰苯肼--------作活体染色（甲基紫） 37℃1~2h
有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒
结果：此类细胞>5%即（＋） ，正常人<30% 意义：不稳定Hb也可出现，故仅作筛选 ⑶ 珠蛋白合成异常的检验 H b 电泳 H bF测定
H bH包涵体生成试验 异丙醇试验
正常血红蛋白的种类
类型 肽链 所占比例 HbA α2β2 正常成人>95%
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HbF α2γ2 正常成人<2%，为胎儿期Hb主要成分 HbA2 α2δ2 正常成人2%-3% 靶形红细胞（target cell）
①血红蛋白电泳分析( hemoglobin electrophresis) 主要检查有无异常Hb区带
在HbA前出现——快速异常：HbH，J，K组 在HbA后出现——慢速异常：HbG，D，E组 HbA2定量测定
正常值：1.5~3%，>5%为升高
② HbF定量测定（碱变性试验）(alkali denaturation test)
HbF具抗碱作用
正常值：成人<2%，新生儿55%~85%，1岁左右同成人 >4%为升高，主要见于β地中海贫血 ③异丙醇沉淀试验( isopropanol test )
正常人Hb 40min后开始沉淀。
有不稳定血红蛋白存在，10min内出现混浊沉淀。 HbF、H、E、α-地贫杂合子、G6PD缺陷，也可假阳性。 ④变性珠蛋白小体生成试验 ⑷ 免疫性溶血的检验
抗人球蛋白试验（Coombs` test） 为检查温抗体（不完全抗体）敏感的试验
主要用于诊断AIHA (autoimmune hemolytic anemia) ① 直接抗人球蛋白试验（DAGT） 测RBC表面结合的抗体（更重要，价值高）
受检者RBC悬液+等量抗人球蛋白试剂，低速离心后观察凝集否--------37℃，15min 如病人RBC膜上有IgG型抗体或C3d抗体则出现凝集反应（+） 抗人球蛋白试剂内有抗IgG抗体，抗C3d抗体（抗抗体）
阳性反应条件：结合在RBC膜上自身抗体（100~500分子数/RBC），分子数过少致假阴性。 ②间接法（IAGT）
测游离特异的抗体（先使RBC致敏，再与抗人球蛋白血清结合 将病人血清和正常RBC混合，再加入抗IgG试剂
Ⅳ、骨髓细胞形态学检查
急性白血病的FAB分型(French-American-British (FAB) classification of acute leukemias)。 (一)急性髓系白血病FAB分类(M0-M7) M0：急性髓系白血病微分化型 M1：急性粒细胞白血病未分化型 M2：急性粒细胞白血病部分分化型 M3：急性早幼粒细胞白血病
M4：急性粒-单核细胞白血病
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*
M5：急性单核细胞白血病 M6：红白血病
M7：急性巨核细胞白血病
分类依据：①形态学；②髓系细胞分化阶段(粒、单、巨核、红白)。
(二)急性淋巴细胞白血病(L1-L3)
L1→原始、幼稚淋巴细胞偏小，直径≤12μm (成人多见，65%)。
L2 →原、幼淋巴细胞以大淋巴细胞为主，直径≥12μm；(成人多见，65%) L3 →大淋巴细胞为主，胞浆嗜硷性，有明显空泡(少见，约2~3%)。
* 分类依据：形态学
（三）急性白血病的实验室检查特点： ①外周血
WBC计数多增加，也可减少，范围1.0~200×10/L；当WBC计数>100×10/L，称为白细胞增多性白血病；当WBC计数正常或减少，
称为白细胞不增多性白血病，血涂片可见原始或幼稚细胞；Hb↓，pt↓。 *②骨髓检查 意义：
a. 是诊断急性白血病的主要依据，必做；
b. 骨髓增生明显或极度活跃，某一系列的原始细胞占全部骨髓有核细胞(ANC) ≥20%。 概念：
a. 白血病细胞“裂孔”现象——急性白血病时，骨髓中有核细胞以原始细胞为主，中间阶段细胞缺如，而残留少数成熟粒细胞的现象。
b. 低增生性白血病——指骨髓增生低下，但原始细胞≥30%者。
c. 奥氏小体(Auer小体)仅见于急非淋白血病，不见于急淋。本质：髓系颗粒聚集物(核糖体)，瑞氐染色呈粉红色。 ③细胞化学染色：
急性髓性白血病(AML)——过氧化物酶染色阳性(Myeloperoxidase, MPO=POX)
急性淋巴细胞性白血病(ALL)——过氧化物酶染色阴性，糖原染色(PAS)阳性，末端脱氧核糖核苷转移酶(terminal
deoxynuc-leotidyl transferase, TdT)阳性。 急性单核细胞白血病(AML-M5)——非特异性酯酶阳性。 ④细胞表面标志——免疫学检查 急淋---→ B细胞标志(5%)；
T细胞标志(15~20%)——CD2、CD3、CD5
常见急淋白血病抗原(common acute lymphoblastic antigen, CALLA), CD10 (50%~65%)
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急非淋→CD13(+)，CD33(+)，HLA-DR(-)→急非淋M3型(APL) ⑤细胞遗传学变化
急粒M3→t (15, 17)，早幼粒白血病基因 (PML)/维甲酸受体基因(RARa)重排，见于90%以上的M3（见图１）。 急粒M2→t (8, 21)，形成AML1/ETO融合基因，见于M2（见图２）。 急淋(L3) → t (8, 14)，异常c-myc基因。 某些急淋→可有t(9, 22)，BCR/ABL融合基因
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